力学作用对骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的影响的研究.pdf

第一章绪论 1．2国内外研究现状 软骨组织工程的基本方法是从一定数量的种子细胞出发，经体外培养扩 增达到一定数量后种植于一种无细胞毒性、生物相容性好、免疫排斥反应低、 并可被人体逐渐降解吸收的支架材料上，诱导种子细胞向软骨细胞分化。在 这个过程中，支架材料可以为细胞提供适合其生存的三维空间，有利于细胞 获得足够的营养物质，使细胞按预制形态的三维支架生长。然后将这种细胞 ．生物材料复合体植入体内缺损部位，在支架材料降解的同时，种植的细胞 继续增殖并分泌软骨基质以逐渐取代降解的支架，最终形成新的具有特殊形 态和一定功能的软骨组织，完成软骨损伤的修复。 Hutmacher[12】将软骨组织工程研究分为六个期：①生物可吸收支架的制 备；②在静态培养体系中将软骨细胞种植在多聚物支架上；③在动力学环境 中培育成熟前组织；④在生理环境中培育成熟组织；⑤外科植入：⑥组织工 程移植物的同化／改建。简单来说，软骨细胞工程研究需要具备3个主要条 件：足够数量功能正常的种子细胞：适当的细胞外支架；调节种子细胞的分 化增殖并维持其表型等特征的诱导条件。 1．2．1种子细胞 在软骨组织工程中，获得一定数量能满足治疗需要的种子细胞是首要问 题。目前获取种子细胞主要途径有：第一，分离自体软骨细胞，体外培养及 扩增。该途径的缺点是，多数老年骨关节炎患者其软骨细胞活力差、体外培 养困难；而软骨损伤的患者又没有足够数量软骨细胞用于软骨修复。第二， 分离异体软骨细胞，异体移植。该途径的缺点是容易产生免疫排斥反应【”j， 异体的软骨细胞或组织不能和缺损部位良好相容，导致临床的修复失败。更 为重要的是，软骨细胞在体外传代，II型胶原逐渐丧失，一般3代以后发生 组织获取大量的软骨细胞。尽管可以将适当的生长因子基因转入种子细胞来 调控细胞的分化和活性，但目前这一方法还受到多方面技术的限制，如：有 效基因的鉴定、基因安全可靠的来源、基因转染的适应条件、转基因细胞的 变异及肿瘤化趋向问题等¨”。 因此，如何解决软骨细胞在体外的有限扩增及其反分化问题就成为软骨 组织工程研究的一个关键。随着对干细胞研究的深入，人们发现人体多种组 stem ceils， 织内存在具有向软骨方向分化的间充质干细胞(mesenchyreal 第一章绪论 stem MSCs)，其中骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalcells，BMSCs) 由于易于大量获取及具有多向分化能力而引起人们广泛的关注，为人工体外 获得大量软骨细胞提供了一条新的途径。BMSCs经诱导可使其在原代培养 时就出现成软骨细胞倾向¨”。Gao等培养大鼠MSCs，分别用成骨和成软骨 条件培养液复合于不问材料的双层支架上植入裸鼠背部皮下，术后6周时检 测新生组织中含有I型胶原(成骨诱导)和II型胶原(成软骨诱导)【17】。2002 年，夏万尧等利用含TGF-13 1的高糖DMEM使传代后的BMSCs向软骨细 胞表型定向诱导分化获得成功【l…。Ichiro Sekiya等在2001年应用成人MSCs 经过诱导后离心成团，在体外无支架条件下培养构建了软骨样组织【l91。 利用这种软骨细胞的前体细胞--BMSCs，而不用己分化成熟的软骨细 胞作为种子细胞，其主要优势在于：①只需要较少数量的初始细胞，就可以 得到成形的软骨。因为BMSCs单层培养时能够在保持其分化潜能不变的前 提下迅速增殖并连续传代【2”。②BMSCs的分裂增殖能力和多向分化能力不 随年龄的增长而改变【2“，从而使这种以细胞为基础的疗法不受年龄的限制。 ③BMscs的获取方便，可通过局部麻醉抽取少量骨髓而得，损伤小。④自 体BMSCs获得的工程化软骨可以避免免疫排斥反应。⑤在诱导条件适合的 情况下，BMSCs可同时向骨和软骨方向分化(即由BMSCs一种细胞出发可 以获得骨和软骨的复合组织)，从而使关节软骨及其下方骨的联合缺损修复 成为可能