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大规模宫颈细胞涂片实验室染色质量控制 　【摘要】 目的：探讨大规模宫颈细胞学涂片实验室染色的方法和流程。方法：改变传统手工染色的工作流程，创造性改动染色流程，严格按照程序操作，控制好每道程序时间。结果：运用改进后的方法和流程，染色效果优良。结论：在纯手工染色的情况下，能控制好大规模细胞涂片染色效果，一个工作日能制作数千张以上质量较高的宫颈细胞学涂片。 【关键词】 巴氏染色；宫颈细胞涂片；质量控制 　　宫颈细胞涂片是妇科普查最常用的方法，它对宫颈炎、宫颈糜烂、宫颈前期病变、宫颈肿瘤的诊断简便而有效。我们实验室每年要承担大量的宫颈细胞涂片的染色和读片工作，工作量之大，规模空前，有时还有时间的阶段性。目前我们采用手工染色，采用经典的巴氏染色法，成功解决了因为数量多，无法做好染色质控等问题，现把我们的成熟经验总结如下。 　　1 染色原理巴氏（Papanicolaou） 　　染色法是脱落细胞染色中最好的染色方法。苏木素染液，细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸（DNA），DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。分化：苏木素染色之后，用水洗去未结合在细胞上的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程成为染色的分化作用。因酸能破坏苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。蓝化：分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下则处于蓝色离子状态，而呈蓝色，所以分化之后用水洗除去酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色，称蓝化作用，一般多用自来水浸洗即可变蓝，也可用温水变蓝。EA 50染液的酸碱度对巴氏染色的成功起着关键性作用，EA 50染液由伊红、亮绿、等染料配成。伊红、亮绿、桔黄等属于酸性染料，在溶媒中其发色团是负离子部分，发色团可与蛋白质中带正电的氨基结合，从而使胞浆显蓝色、绿色、桔黄色或红色，但蛋白质所带正负电荷的多少是随溶液的pH值而改变的，在偏碱环境中，蛋白质的羧基游离增多（带负电），在偏酸环境中蛋白质氨基游离增多（带正电），磷钨酸在染色过程中，不但作为媒染剂可增加染料的着色力，同时磷钨酸与碳酸锂还是一对弱酸弱碱，实际上是一对缓冲剂，可中和分色及蓝化时可能留下的少量酸或碱，保证染色达到理想效果，其适用于上皮细胞及间皮组织的标本，是阴道脱落细胞检查中最常用的染色方法，该染色法不但具有显示细胞核结构清晰、分色明显、透明度好、胞浆受色鲜艳等特点，而且所染标本不易脱色，可长久保存。 　　2 试剂配方 　　2.1 苏木素染色液的配方 见表1。 　　表1 苏木素染色液的配方（略） 　　2.1.1 甲液 苏木素10 g，溶于100 ml无水酒精（水浴加温溶解，50℃左右） 　　2.1.2 乙液 硫酸铝钾200 g，溶于2 000 ml蒸馏水（电炉加热溶解，至煮沸） 　　2.1.3 甲液和乙液分别充分溶解后，将甲液缓缓加入乙液，充分煮沸10 min； 　　2.1.4 两液混合后继续加热至煮沸后，缓慢加入氧化汞5 g，加入氧化汞时，应保持甲乙混合液呈小泡状沸腾； 　　2.1.5 氧化汞加完后，继续呈小泡状煮沸片刻，迅速将烧瓶移入自来水中冷却降温； 　　2.1.6 使用前过滤。 　　2.2 橘黄G的配方 　　2.2.1 先配10％橘黄G水溶液 10 g橘黄G溶解于100 ml蒸馏水中，存储于深棕色的瓶中，使用前要过滤。 　　2.2.2 配制橘黄G的染液 见表2。 　　表2 橘黄G的配方（略） 　　注：上述各种试剂搅拌溶解即可使用。 　　2.3 EA50配方 见表3。 　　2.3.1 先配5％淡绿 称取5 g亮绿溶于5 ml蒸馏水中，然后加入无水酒精至100 ml； 　　2.3.2 20％伊红 称取20 g伊红溶于20 ml蒸馏水中，然后加入无水酒精至100 ml； 　　　表3 EA50的配方（略） 　　注：加入磷钨酸后搅拌溶解即可使用。 　　2.4 1%盐酸分化液 500 ml的95％酒精加入蒸馏水100 ml，再加入浓盐酸6 ml~7 ml，即可使用。 　　3 染色流程 　　3.1 染色步骤 将待染色载的玻片先用自来水浸洗1 min~2 min，甩干水滴；放入Harris苏木素液染5 min~8 min后水洗；分化：浸入1%盐酸分化，浸2次~4次（以变成桃红色为适宜），后水洗；蓝化：稀碳酸锂液返蓝（1 min~2 min后在自来水中返蓝或放置在水中5 min以上），或者直接放在温水中（温度在38℃左右）；过两缸95%酒精各1 min；橘黄G 1 min，后依次在两缸95%酒精中漂洗，去掉多余的橘黄；放入EA50