水溶性壳聚糖及壳寡糖吸湿保湿性能及对几种致病菌抑制作用研.docVIP

水溶性壳聚糖及壳寡糖吸湿保湿性能及对几种致病菌抑制作用研 　 作者：伏国庆　冯小强　杨声　李小芳　苏中兴 【摘要】 研究了水溶性壳聚糖、壳寡糖的吸湿性、保湿性能和其对铜绿假单胞菌、粪肠菌和肺炎克伯菌的抑菌作用。 【关键词】 水溶性壳聚糖；壳寡糖；吸湿性；保湿性；抑菌作用 生物活性多糖作为功效性化妆品添加剂在化妆品中的应用，是生物美容的一个重要方向。壳聚糖(Chitosan)作为一种自然界贮量丰富的天然活性多糖，是甲壳素（Chitin）脱乙酰后的产物,其分子内同时存在游离的氨基和羟基,具有特殊的生理活性,尤其是在抗菌抑菌方面。然而壳聚糖是一高分子化合物,分子量通常在几十万至上百万,且分子结构紧密,因而不能溶于水等普通溶剂,难以被吸收利用,限制了其应用［1］。同壳聚糖大分子相比,壳寡糖具有:较好的水溶性;吸湿保湿性;抗菌、抑菌功能。将壳寡糖和水溶性壳聚糖应用于化妆品中，不仅能产生保湿、稳定改善肤色、抗衰老和抗菌等功效外，还能祛除皮肤中过剩的重金属离子。因此，壳寡糖和水溶性壳聚糖作为功效型化妆品添加剂有着广阔的前景。本文就水溶性壳聚糖和三种不同分子量壳寡糖的吸湿、保湿性能及其对三种致病性菌铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、粪肠菌（Enterococcus faecalis）和肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumonia ）的抑制作用做了研究, 以期为壳聚糖在化妆品领域的应用提供依据，目前该方面的报道还未见到。 　　1 实验仪器和材料 　　1.1 实验仪器 　　LDZX 40ＣＩ型立式自动电热压力蒸汽灭菌锅(上海中安医疗器械厂);DHG 9070Ａ型电热恒温干燥箱(上海益恒实验仪器有限公司);生化培养箱(国华电器);SNCJ 1BU无菌操作台(苏净集团安泰公司)；DENSIMAT型细菌电比浊仪（法国生物梅里埃公司）。 　　1.2 实验材料 　　1.2.1 水溶性壳聚糖 　　（自制，DD.85.3%、粒度100目、粘度30 Mpa.s）；壳寡糖(分子量3000,5000,10000,DD.gt;95 %,自制［2］)。 　　1.2.2 供试菌种 　　铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）、粪肠菌（Enterococcus faecalis）和肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumonia ）均为标准菌株。 　　1.2.3 琼脂蛋白胨固体培养基［3］（pH 7.3）。 　　2 实验方法 　　2.1 吸湿性和保湿性测定 　　室温下,将壳寡糖样品在干燥器中用五氧化二磷真空干燥12 h。吸湿性试验直接用该干燥样品。而保湿性试验则在干燥样品中加入其质量10 %的去离子水。 　　2.1.1 吸湿性测定 　　精确称取0.5 g样品两份,分别加入直径3 cm的称量瓶中,将称量瓶分别放置在两个干燥器中,一个干燥器内放有硫酸铵饱和溶液(相对湿度RH=81 %),另一个干燥器内放有饱和碳酸钠溶液(RH=43 %),放置时间为12 h、24 h、48 h,分别称量样品放置前质量(Wo)和放置后质量(Wn)根据下式计算吸湿率：吸湿率/%=100(Wn-Wo) Wo2.1.2 保湿性测定 室温下,精确称取0.5 g样品两份,分别加入直径3 cm的称量瓶中,加入质量分数为样品量10 %的水。一个称量瓶放置在预先装有饱和碳酸钠溶液(RH=43 %)的干燥器内,另一个放入装有干硅胶的干燥器内。放置时间为12 h、24 h、48 h,分别称量样品放置后水份量Hn和添加水份量Ho。根据下式计算水份残存率:水粉残存率/%=100 Hn Ho 　　2.2 体外抑菌实验 　　2.2.1 壳聚糖溶液的配制 　　以1 %HAc为溶剂，配制浓度为1.2 %、1.0 %、0.8 %、0.6 %、0.4 %、0.2 %的水溶性壳聚糖及壳寡糖溶液，置于4℃冰箱中待用。 　　　2.2.2 菌种的活化 　　受试菌种接种于固体培养基内,在37℃ 活化24 ｈ。 　　2.2.3 菌悬液的制备 　　将活化后的受试菌种用接种环挑取菌苔于生理盐水中，稀释成含菌数浊度约为0.5 Mcf左右的菌悬液备用。 　　2.2.4 抑菌测试方法（琼脂扩散纸片法） 　　将直径为6 mm的圆形滤纸片放入各不同浓度的水溶性壳聚糖和壳寡糖溶液中一同高压蒸汽灭菌（120℃、0.12 MPa）20 min。取各种菌悬液100 μl均匀涂抹在培养基平皿表面，用无菌镊子将各滤纸片贴在各种含菌平皿上，每皿贴7个，分别对应于浓度及对照(中间)。本实验壳聚糖浓度设置分别为1.2 %、1.0 %、0.8 %、0.6 %、0.4 %、0.2 %。并以1 %的醋酸为对照, 对照样除不加壳聚糖外,其他条件与加有壳聚糖的培养基一致。每种菌种重复3次试验,在37℃下培养24 h,