核酸04-4.pdf

§6 – 5 核酸的性质 §6 – 5 核酸的性质 • 一般理化性质 • 紫外吸收性质 • 核酸的变性与复性 • RNA分子在糖基2’ 上比DNA分子多一个 OH基； • 其相对分子量低于DNA ； • RNA分子一般为单链分子，因此容易形成 自由能最小的独特的二级结构——局部双 螺旋； • RNA分子的化学性质比DNA活泼得多： RNA分子遇碱极易降解，而DNA则不。 一、一般理化性质 一、一般理化性质 1、水解性： 可被酸、碱或酶水解，DNA比RNA对 稀 碱稳定。 2、溶解性： 微溶于水，不溶于一般有机试剂（乙 醇沉淀核酸），钠盐易溶于水。 原因：结构中磷酸核糖骨架在外。 3、分子形状和相对分子量： 3、分子形状和相对分子量： 1）核酸分子量大: 8 12 DNA相对分子量：10 ‾10 ， 其直径/长度（d/ l）=10 –7 因此: 粘度高：一般DNA比RNA粘度高。 2）核酸的沉降行为和浮力密度： 2）核酸的沉降行为和浮力密度： • 离心沉降速率法： 盐、蔗糖等介质的超速离心。 沉降速率与分子大小、形状、密度、介质 有关 • 沉降平衡法： 氯化铯密度梯度离心 沉降速率与分子组成、结构有关 • 浮力密度:经密度梯度沉降平衡法测出的密度. • 测定浮力密度常用超速离心，一般用8mol/L 超速离心，一般用8mol/L 氯化铯溶液，45000转/min ，16h以上。此时 氯化铯溶液，45000转/min ，16h以上。此时 离心管中形成氯化铯密度梯度，管顶 离心管中形成氯化铯 1.55g/cm3 3 ，管底1.80 g/cm . • 样品DNA的沉降速度与扩散速度达平衡时， 形成一稳定区带，此处的氯化铯密度等于 DNA的浮力密度。 • 超速离心： 相对分子质量相同时的沉降速度: 沉降速度: 环状＞线形； 环状＞线形 单链＞双链； 单链＞ RNA ＞DNA ＞pr ＞DNA ＞pr 相对沉降常数 相对沉降常数 • 线型双螺旋分子 1.00 • 松驰双链闭环 1.14 • 切刻双链环 1.14 • 单链环 1.14 • 线型单链 1.30 • 正超或负超螺旋双链环状 1.41 CsCl 密度梯度离心 （48h）的应用 CsCl 密度梯度离心 （48h）的应用 ①通过浮力密度了解分子构象： 超螺旋＞环状＞线 超螺旋＞环状＞线 ②用