苦参碱诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡实验探究.docVIP

苦参碱诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡实验探究 　【摘要】 　　本研究探讨苦参碱对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的作用及其机制。用不同浓度苦参碱处理RPMI8226细胞24、48小时，通过形态学观察、AnnexinV分析、DNA琼脂糖电泳、线粒体膜电位检测观察苦参碱对RPMI8226细胞的促凋亡作用。结果表明： RPMI8226细胞经苦参碱处理后，出现典型的细胞凋亡形态，凋亡早期细胞膜外翻，DNA琼脂糖电泳出现典型的梯状结构，线粒体膜电位崩塌。结论： 苦参碱能有效地诱导骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞凋亡，凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖性。 【关键词】 苦参碱 多发性骨髓瘤 RPMI8226细胞株 细胞凋亡 　　Apoptosis of Multiple Myeloma RPMI8226 Cell Line Induced by Matrine Abstract This study was aimed to investigate the effect of matrine on multiple myeloma RPMI8226 cell line and its mechanism. The RPMI8226 cells were treated with various concentrations of matrine for 24 and 48 hours; the promotingapoptosis effect of matrine on RPMI8226 cells was observed by morphology, AnnexinV analysis, DNA agarose gel electrophoresis, mitochondrial transmembrane potential detection, etc. The results indicated that after treatment of RPMI8226 cells with matrine, the typical morphology of cell apoptosis appeared, AnnexinV analysis showed positive, the typical ladder was observed in DNA agarose gel electrophoresis, and the mitochondrial transmembrane potential decreased. It is concluded that the matrine can effectively inhibite the RPM8226 cell growth and reduce cell viability in doseand timedependent manner. It is presumed that the matrine induces RPMI8226 cell apoptosis through mitochondrial signaling pathway. Key words matrine; multiple myeloma; RPMI8226 cell; apoptosis 多发性骨髓瘤(MM)是一种浆细胞克隆性增生的血液系统恶性肿瘤，多发生于老年人。随着社会人口的老龄化，其发病率呈逐渐增高的趋势。几十年来对MM一直采用激素和细胞毒性药物联合治疗，但其仍是一种不可治愈的血液系统肿瘤。由此可见，研发新的治疗方法具有重要的临床价值［1,2］。苦参是传统的中草药,具有抗肿瘤抗炎的作用，苦参碱是其中主要的生物碱。多年来的药理和临床研究发现苦参有抗病毒、抗炎、镇痛解热作用和强心、降压、抗心律失常、抗肿瘤作用，特别是抗瘤作用的发现引起了人们的普遍关注［3］。我们的研究结果证实，一定浓度的苦参碱能够诱导骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡。 材料和方法 材料 多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞由本实验室保存。苦参碱由中国生物制品、药品检定所提供，用RPMI 1640培养液调整浓度为10 mg/ml, 4℃保存。RPMI 1640培养液购自Hyclone公司。AnnexinV凋亡检测试剂盒,Rh123及PI购自晶美生物技术公司。流式细胞分析仪FACS Calibur为Beckman公司产品。 细胞培养 RPMI8226细胞培养于含10％小牛血清的RPMI 1640培养液中，取对数生长期细胞，调整细胞浓度为2×105/ml，加入苦参碱使其终浓度分别为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mg/ml，于37℃、5% CO2条件下培养24、48小时。对照组除不加