用1.8 μm 反相(RP) 色谱柱进行快速氨基酸分析(AAA).pdf

用1.8 µm 反相 (RP) 色谱柱进行快速氨基酸分 析 (AAA) 应用 制药与食品 作者 引言 Cliff Woodward and John W. Henderson Jr. 氨基酸的检测和定量分析一直是蛋白质和食品分析的 安捷伦科技公司 重要部分，1951 年Moore 和 Stein 研制出了第一台 2850 Centerville Road Wilmington, DE 19808 氨基酸分析仪，将未衍生的氨基酸(AAs) 用离子交换 USA 色谱分离后，用茚三酮进行柱后衍生，在可见区检测 Todd Wielgos [5]。1958 年由Beckman 开发并推出了全自动分析 Baxter Healthcare Corp. 仪。它成为蛋白质分析的里程碑，并在 1972 年诺贝 Round Lake, IL 60073 尔化学奖核糖核酸酶的研究中发挥了重要作用。以前 USA 需要几周完成的分析，用该方法不到 天就可以完成。 1 Beckman 新一代的氨基酸分析仪已将分析时间缩短 摘要 到大约 110 分钟，但用茚三酮灵敏度仍然有问题。 氨基酸分析 (AAA) 常被用作蛋白质组学和食品质量检测中测 用邻苯二甲醛 (OPA) 和巯基乙醇进行柱后衍生反应 定样品中氨基酸 (AA) 准确组成的工具。为了及时分析样品， 有一些可能，但却只能检测一级氨基酸 （见图 ）。 1a 需要分析周 短；为了测定有限量的样品需要高灵敏度的方法； 1971 年首次报道了用 OPA 对氨基酸进行柱前衍生 为了提高实验室效率，需要自动化的方法。本文报道了用新开 [6]。衍生物相当不稳定，但这一过程可以实现自动 发的1.8 µm 粒径色谱柱测定氨基酸的新方法。这种专利的填料 化。灵敏度得到了提高，特别是使用荧光检测(FLD) 经过专门设计，其产生的反压比市场上任何其它亚 微米填料 2 时。OPA 不发荧光，其衍生物有很强的荧光，但二 都小，可以在400 bar HPLC 系统以及耐压更高的仪器上使用。 级氨基酸仍不能检测。另一种衍生化试剂氯甲酸 芴 9- 我们采用惠普 安捷伦公司 年首次推出的 化 / 1988 OPA/ FMOC 基甲酯(FMOC) 和一级、二级氨基酸都能反应