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目錄 中文摘要 ………………………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………………3 前言 ……………………………………………………...………………………….…5 一、血管內皮細胞的結構和功能……………………………….………………...….5 二、血管內皮細胞功能異常………………………………………………………….6 三、血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor)和血管新生 (Angiogenesis)………………………………………………………………………...7 四、影響VEGF 表現的因子…………………………..…………………………..…..9 (1) 、缺氧（Hypoxia ）………………………………………………..…..………….9 (2) 、細胞激素（Cytokines ）和生長因子（growth factors ）……….……………….10 (3) 、細胞分化（differentiation ）和細胞轉型（transformation ）…….….…………..10 (4) 、性類固醇（sex steroids ）…………………….….………………………………..11 五、不同種類血管內皮細胞系統之介紹……….…………………….……………..11 六、為什麼用鰻魚當作模型……………………………………….………………..12 實驗目的 ……………………………………………………………………………..14 實驗材料 ……………………………………………………………………………..15 儀器 …………………………………………………………………………………..16 實驗的方法 …………………………………………………………………………..17 一、初代細胞培養（Primary cell culture ）………………………….……………..17 (一) 、內皮細胞的取得……………………………………………………………….17 (二) 、細胞培養之培養液配製（culture medium ）…………………………….….17 (三) 、細胞數目的測定……………………………………………………………….18 (四) 、藥品的配置…………………………………………………………………….18 (1) 、雌二醇（Estradiol ）的配製………………..…………………………….……..18 I (2) 、睪固酮（Testosterone ）的配製………….…………………………………….18 (3) 、黃體激素（Progesterone ）的配製………………………………..………….….18 (4) 、人類絨毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotropin ）的配製………...…19 (5) 、氯化鈷（CoCl ）的配製………….………………………………..……………19 2 (6) 、多巴胺（Dopamine）的配製………………………………………….…….……19 (7) 、鹼性纖維母細胞生長因子（basic Fibroblast growth factor ）的配製…..…19 二、內皮細胞的證明…………………………………………………………..……19 (一) 、DiI-AcLDL （Acetylated low-density lipoprotein ）………………….…….…..19 (二) 、DAF （4,5-Diaminofluorescein ）…………………………………….…………20 (三) 、聚合酶連鎖反應(polymerase chain reaction ，PCR)與定序…………….…….20 (四) 、免疫染色法（Immunostaining ）…………………………………………..21 三、細胞對藥物處理後的生長代謝之測定……………………………….………..22 (一) CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay………..…….22 四、血管內皮生長因子（VEGF ）基因表現的分析…………….………..………..22 (一) 、藥物處理細胞………………………………………………..…