试验2lowry-folin法测定食品中蛋白质含量-江南大学教务处.pptVIP

一、目的 了解测定蛋白质的常用方法 掌握蛋白质含量测定的经典Lowry-Folin法 二、仪器及材料 试剂A：称取Na2CO3 100.0g溶于1000 mL（最终体积）0.5 mol/L NaOH中。 试剂B：称取CuSO4?5H2O 1.0 g溶于100 mL（最终体积）蒸馏水中。 试剂C：称取酒石酸钾钠2.0g溶于100 mL（最终体积）蒸馏水中。 牛血清蛋白（BSA）标准溶液：准确称取牛血清蛋白，配制成浓度为200 ?g/mL的溶液。 2 mol/L Folin-酚试剂 三、原理 ?在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物 ?Folin-酚试剂中的磷钼酸盐-磷钨酸盐被蛋白质中的Tyr和Phe残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物） 在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。在540 nm处测定样品吸光值，确定其蛋白质含量 四、实验步骤 1. 标准曲线的绘制及样品测定 不同浓度BSA溶液的配制 五、注意事项 1. 加入Folin-酚试剂后立即将反应液摇匀，以便Folin—酚试剂在碱性溶液中破坏之前即能被铜-蛋白质复合物还原。 2. 短时间内反应液的颜色保持稳定，因此，静置45 min后应立即测定吸光度，若拖延时间过长，颜色将会变化，影响测定结果。 六、思考题 1. 测定食品中蛋白质含量的常用方法有哪些？其原理、适用性如何？ 2. 使用分光光度计时应注意哪些问题？ 江南大学《食品化学》课程小组 实验2 Lowry-Folin法测定食品中蛋白质含量 江南大学《食品化学》课程小组 （2）试剂A 15.00 mL+试剂B 0.75 mL+试剂C 0.75 mL→在50 mL三角瓶中混匀→在每支试管中分别准确加入此试剂1.00 mL，充分摇匀，静置15min （3）分别在各试管中准确加入Folin-酚试剂稀释液3.00 mL，立刻充分摇匀 （4）静置45min，在540 nm波长下测定每个试管中溶液的吸光值 （5）以所得A值为纵坐标，BSA 质量为横坐标，绘制标准曲线，求出回归方程和相关系数R。一元线性回归方程的斜率即为K值 2. 样品的测定 将啤酒样品适当稀释，吸取2份，各1.00 mL，重复步骤1中的(2)~(4)。