抗菌肽cm4组分对k562癌细胞染色质dna断裂作用的scge研究3.pdfVIP

·64 · 生物化学与生物物理进展 　　Prog. Biochem. Biophys. 　　　　　1998 ; 25 ( 1) 抗菌肽 CM4 组分对 K562 癌细胞 染色质 D NA 断裂作用的 SCGE 研究 王 　芳 　张双全 　戴祝英 (南京师范大学生物系 , 南京 2 10097) 摘要 　单细胞凝胶电泳法 ( singe cell gel electrop horesis , SC GE) 是一种快速 , 敏感的检测单个哺乳动 ( ) 物细胞 DNA 断裂的技术 , 也叫彗星实验 comet assay . 此实验首次通过 SC GE 法观察抗菌肽 CM4 组 分对人髓样白血病 K562 细胞和正常人 白细胞核染色质 DNA 的影响 , 从而进一步研究抗菌肽抗癌作 用的机制. 荧光显微镜观察显示经抗菌肽 CM4 组分处理过的 K562 癌细胞核染色质 DNA 出现断裂 , 形成一个亮的荧光头部和彗星似的尾部 , 而经同样处理的正常人白细胞和未经抗菌肽处理的 K562 癌 细胞核染色质 DNA 未 出现断裂 , 核完整 , 呈 圆形. 经彗星尾长分析 , 前者 DNA 损伤率平均为 7362 % , 统计学处理 P 0 00 1 , 具高度显著性差异. 这表明 , 抗菌肽 CM4 对 K562 癌细胞核染色质 DNA 有明显的断裂作用 , 而对正常人白细胞则没有断裂作用. 关键词 　单细胞凝胶电泳 , 抗菌肽 , K562 癌细胞 , 染色质 DNA 学科分类号 　Q523 　　70 年代后期 , Rydberg 和 Johanson 等[ 1 ] 细胞染色质结构状态和 DNA 超螺旋程度 首先用定量方法对单细胞 DNA 断裂进行了研 是影响细胞 DNA 复制 、转录及损伤 、修复的 究. 1984 年 , Ostling 等[2 ] 采用中性微凝胶 电 重要环节. 细胞染色质结构状态的研究已成为 泳技术使这一方法的灵敏度进一步提高. 1988 肿瘤细胞生物学及放射生物学所共同关注的问 年 , Singh [3 ] 采用碱性 电泳并结合溴化 乙锭 题[5 ] . 我们成功地利用单细胞凝胶 电泳技术 ( EB) 染色能显示遇碱不稳定和 明显断裂 的 定量研究了纯化的家蚕抗菌肽 CM4 组分对人 DNA . 经荧光显微镜观察 , 单个受损细胞在 髓样白血病 K562 癌细胞核和正常人白细胞核 电泳时 , 其断裂的 DNA 从核中向阳极伸展 , 染色质 DNA 的影响 , 以探索抗菌肽 的抗癌 形成一个亮的荧光头部和尾部 , 形似彗星 , 故 机制. 又称彗星实验 , 或单细胞凝胶电泳. 此实验能 检测 DNA 损 伤 与 修 复 在 细 胞 间 的差 异 , 1 　材料和方法 105 ku 中可检出 01 个 DNA 断裂 , 甚至可检 11 　供试材料 测到自然光照射体外淋 巴细胞 1 h 所引起的 111 　家蚕 (Bombyx mori ) : 品种 苏 5 × DNA 损伤. 它同样可用于检测静止状态的细 苏 6 , 中国农业科学院蚕业研究所提供. 32 胞 , 且对 T 、B 细胞均敏感 , 和用 P 标记的 112 　K562 癌细胞 : 中国人民解放军八一医 DNA 检测灵敏度一致 , 并被认为是低水平辐 院提供. ( ) 检