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酶工程报告;目 标 问 题;1.脂肪酶; 脂肪酶作为生物催化剂可催化由不同底物出发的水解和合成反应。这些反应通常具有高底物专一性、区域选择性或对映选择性, 使脂肪酶成为有机合成中重要的生物催化剂, 广泛应用于油脂、食品、香料、化妆品、医药、农药等有机合成领域中。微生物脂肪酶多数来源于真菌和细菌, 大量的脂肪酶已商业化生产。最新公布的34 种不同来源的商业化脂肪酶中有18 种来源于真菌, 7 种来源于细菌。参考文献：第 26 卷 第 3 期 彭立凤等: 微生物脂肪酶的应用 食品与发酵工业 Food and Fermentation Industr ies Vol 26 No 3;2.纤维素酶;纤维素酶的检测 1 . 滤纸酶活: 取经适当稀释的酶液0. 5 m l, 加入lm l pH 4.8 的醋酸一醋酸钠缓冲液, 摇匀后投入一张1x6c m 的滤纸,50 ℃ 保温lh, 然后加入3 m l D N S 试剂, 煮沸5 m in , 冷却后加入20 m l 蒸馏水, 摇匀, 于5 4 0 n m 下比色,测定还原糖浓度, 换算成每lm l 酶液产生葡萄糖毫克数, 以每分钟产生 1 M m ol 的葡萄糖为1个国际单位。 2 .微结晶纤维素酶活: 取稀释酶液lm l,加入1m 1% 的微结晶纤维素A vi ce l( 悬浮于p H 5.0 醋酸一醋酸钠缓冲液) 溶液,50 ℃ 下反应1h, 取上清液0.5m l, 用D N s 法测糖, 以每分钟产生1M m ol 的葡萄糖为1 个国际单位。 3 .羧甲基纤维素酶活: 取稀释酶液0.5m l, 加入0.5m l l % 梭甲基纤维素CMC 溶液(溶于p H 5.0醋酸一醋酸钠缓冲液),5 0 ℃下反应3 0m in , 加入3 m l D N S 试剂测糖, 以每分钟产生1M m ol 的葡萄糖为1 个国际单位。 4. β-葡萄糖苷酶活: 取稀释酶液0.5ml,加入0.5ml 1% 水杨素(溶于p H 4.8 醋酸-醋酸钠缓冲液) 溶液,50 ℃ 下反应30 m in , 加入3 m l D N S 试剂测糖, 以每分钟产生1 M m ol 的葡萄糖为1 个国际单位。; 纤维素酶的生产 纤维素酶的生产和其他微生物酶制剂一样, 可采用固体培养和液体深层培养。固体培养法有曲盘培养、帘子培养、 厚层机械通风培养等方法, 生产上常采用厚层通风培养。培养基主要以鼓皮为主, 再适当添加富含纤维素的物质及无机氮源。纤维素酶为诱导酶, 培养基中必须含有纤维素物质, 常用的有微结晶纤维素、稻草粉、废纸浆、滤纸粉、报子粉、蔗渣、麦杆、效皮、玉米皮粉、棉花等。生产时采用袍子液接种, 木霉、曲霉的培养温度为30 ℃ , 发酵时间4 一7 天, 控制一定的湿度。发酵结束后用水抽取酶, 经过滤后用酒精或硫按沉淀酶, 然后过滤、千燥, 混入填充剂、稳定剂等制得纤维素酶制剂。 参考文献：酿酒科技1 9 9 7 年 第6 期(总第5 4 期) 纤维素酶的作用机理及开发应用 王兰芬;;过氧化氢酶的用途 棉制品氧漂处理后, 若布面和水浴中残留双氧水, 将破坏活性染料的反应性基团, 使染料与棉纤维之间 不能形成有效共价键, 造成色浅、色花等染疵。对此, 传统方法采用大量热水反复清洗来去除, 这样不仅要 耗费大量的水、电、汽, 工艺冗长, 且去除不完全, 影响产品质量。采用过氧化氢酶对漂白后的棉制品进行处理可有效解决这些问题 。另外, 作为天然发酵的蛋白质, 过氧化氢酶可生物降解, 具有优良的环保性能。 参考文献：过氧化氢酶TF-160的酶活测定及其应用 俞英珍, 陈红梅(浙江传化股份有限公司, 浙江萧山311215)中图分类号: TS197 文献标识码: C 文章编号: 1000- 4017( 2008) 06- 0033- 03;4.超氧化物歧化酶;超氧化物歧化酶的活性测定 超氧化物歧化酶的活性可以反映机体清除氧自由基的能力。SOD 的活性测定按照原理不同主要分为直接测定法和间接测定法。 1.直接测定法 直接法的原理是通过直接测定反应过程中超氧阴离子自由基(·0 2 -)浓度的变化, 获得SOD 与 (·0 2 -)反应的动力学信息, 进而测定SO D 的活性。直接法主要包括极谱氧电极法、极谱法、截流光谱分析法等。;2 .间接测定法 间接测定法的原理是: 有一个产生超氧阴离子自由基(·O2 -)的体系, 产生的(·O2 -)随即进行一个便于检测的反应, 通过检测S O D 对这个反应的抑制程度来间接测定SOD 的活性。间接测定法按照SO D 抑制的反应不同, 主要分为邻苯三酚自