运输应激对刀鲚生理生化指标和hpi轴基因表达影响及甘草甜素的作用.doc

运输应激对刀鲚生理生化指标和HPI轴基因表达影响及甘草甜素的作用 高金伟1，杜富宽2，顾若波1,2，徐钢春1,2 （1.南京农业大学 无锡渔业学院，江苏 无锡 214128；2.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室，江苏 无锡 214128） 摘要：以刀鲚（Coilia nasus）为研究对象，运用荧光定量和相关生化测定方法，研究运输应激对下丘脑-垂体-肾间组织轴（HPI）基因表达和肝脏氧化指标的影响；同时采用浸泡的方式研究甘草甜素（glycyrrhizin, GL）对以上指标的调控作用。结果显示：运输后，脑中促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）基因、阿黑皮素原（POMC）基因和硬骨鱼紧张肽（UI）基因的表达水平显著降低；头肾中皮质醇受体（GR）基因的表达水平运输2h明显下降，4h时表达水平最低，8h显著升高。运输应激可以明显降低肝脏过氧化氢酶（CAT）的活性，显著提高肝脏丙二醛（MDA）的水平，而对谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）和脂质过氧化物（LPO）无显著影响。添加甘草甜素6h后头肾GR基因的表达水平降低，脑中CRH和POMC基因的表达水平显著升高，但是脑中UI基因的表达水平无明显变化。此外，添加甘草甜素对肝脏CAT、MDA、GSH-PX和LPO无显著影响。以上结果表明，运输应激调控HPI轴的基因表达发生了不同程度的变化，而且降低了机体的抗氧化能力，使刀鲚处于氧化应激状态中。GL也可以影响HPI轴的基因表达，但不能有效缓解刀鲚的运输应激引发的氧化应激。 关键词：刀鲚；运输应激；甘草甜素；HPI 研究亮点：刀鲚（Coilia nasus）对外界条件的变化十分敏感，运输过程中极易产生应激反应。本研究在生化和基因水平探究了刀鲚在运输过程中氧化应激相关生化因子和HPI轴关键基因的应答情况，阐明了刀鱼的运输胁迫可以激活氧化应激，这可能是刀鲚应激性损伤和死亡的重要原因之一。本研究为刀鲚的繁养殖生产实践中操作标准的制定提供了科学依据。 中图分类号：S 918.1 文献标识码：A刀鲚(Coilia nasus)，隶属于硬骨鱼纲、鲱形目、鳀科、鲚属，又名长颌鲚，俗称刀鱼，是我囯长江中下游重要的洄游型肉食性鱼类。刀鲚以肉质鲜嫩肥美，肥而不腻而著称，与鲥鱼、河豚并称为“长江三鲜”[1]。历史上，刀鲚的年产量和资源量都相当丰富，近年来，由于过度捕捞、水体污染及长江水域生态环境的变化等诸多因素的影响，刀鲚的产量连年下降，资源严重衰退，个体低龄化，群体趋小化，难以形成渔汛[2]。随着刀鲚灌江纳苗[3]、池塘扩繁[4]、人工繁殖及苗种培育技术[5,6]等的突破,刀鲚正逐渐成为具有较高经济价值的特种养殖对象。但是刀鲚习性较特殊，受到刺激后反应强烈，出水极易死亡，“离水即死”的问题导致捕捞和运输困难，逐渐成为限制其规模化养殖和产业化的“瓶颈”[7]。因此，以刀鲚为研究对象，深入阐述和研究鱼类应激过程中的生理变化和下丘脑-垂体-肾间组织轴(hypothalamus-pituitary-interrenal axis, HPI)神经内分泌调控机制，有着广泛而重要的生理意义和实践意义。目前，国内外关于水生动物的运输应激方面的研究不多，在美洲鲥(Alosa sapidissima) [8]、欧亚鲈鱼[9](Perca fluviatilis L.)、大西洋鲑[10](Salmo salar L.)等鱼类中都有一些报道。 收稿日期：2014-12-22 基金项目：公益性行业（农业）科研专项（201203065）；国家科技支撑计划项目（2012BAD26B05）；江苏省科技支撑计划项目（BE2014307）；江苏省青年基金项目（B，江苏省水产三新工程项目（Y2013-33） 作者简介：高金伟（1992- ），男，硕士研究生，研究方向为水产动物疾病防治。Email:gaojinwei163@163.com 通信作者：徐钢春，Email:xugc@ 鱼类的运输、拉网和操作胁迫等物理因子刺激可以引发其应激反应。刀鲚应激反应强烈，是研究应激调控机理的良好材料。王宇等研究了刀鲚的捕捞操作胁迫过程中内分泌因子的变化。结果表明，促肾上腺皮质激素（CRH）、硬骨鱼紧张肽（UI）、阿黑皮素原（POMC）等内分泌相关基因通过下丘脑-垂体-肾间组织轴（HPI）参与刀鲚应激反应调节[11]。杜富宽等通过对比应激前后刀鲚肝脏转录组，发现其应激反应会全面启动代谢和免疫相关基因的表达，肝脏代谢的瞬时增强，诱发了氧化应激反应，进而导致肝脏等组织受到一定程度的损伤，造成机体不可逆转的生理变化[12]。从草本植物甘草的根、茎中提取出来的甘草甜素（glycyrrhizin, GL）具有增强免疫，抗氧化，抗溃疡，抗炎，抗病毒，抗血栓，抗肿瘤，抗