细菌的培养法细菌代谢产物的检查非特异性免疫一.pptVIP

* 尿素酶分解尿素产生氨，呈碱性，培养基中的酚红指示剂变红。变形杆菌为阳性，大肠埃希菌为阴性。 * 四联球菌：脂溶性色素。铜绿假单胞菌：水溶性色素 * 大肠杆菌阳性，伤寒沙门菌阴性。滴吲哚时沿管壁徐徐滴入 * 原理：有些细菌具有过氧化氢酶，能分解过氧化氢，释放出初生态氧，生成氧分子出现气泡。1min内有大量气泡产生者为阳性。 金葡为阳性，链球菌为阴性。 * 某些细菌具有氧化酶，能将盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺氧化成紫红色的醌类化合物。 用滤纸条蘸取菌落，滴加氧化酶试剂。或直接将试剂滴加于培养皿菌落。阳性者立刻出现红色，继而逐渐加深（如果加的是盐酸四甲基对苯二胺，阳性呈蓝色）。脑膜炎奈瑟菌、铜绿假单胞菌为阳性，肠杆菌科细菌为阴性。 非特异性免疫又称天然免疫或固有免疫。人一生下来就具有，而特异性免疫需要经历一个过程才能获得。 机体的正常生理屏障：皮肤和黏膜系统、血脑屏障、胎盘屏障等。 吞噬细胞的吞噬作用：吞噬细胞、杀伤细胞、树突状细胞等。 固有免疫分子：补体、细胞因子、酶类物质等。 溶菌酶是小分子碱性蛋白质， * * * 细菌的培养法细菌代谢产物的检查非特异性免疫 一、细菌的培养法 （一）培养基简介 基础培养基 血琼脂培养基 SS培养基（Salmonella, Shigella) 庖肉培养基 脱纤维兔/羊血 胆盐 枸橼酸钠 煌绿 硫代硫酸钠 枸橼酸铁 乳糖 中性红 肉渣 石蜡 （二）细菌的培养（自做） 菌种：金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌 培养基: 琼脂平板 琼脂斜面 营养肉汤 半固体培养基——接种针 接种环 1.平板接种法——分区划线法 单菌落 每一步灭菌后冷却 2. 斜面接种法 取 菌 3. 营养肉汤接种法 取菌 4. 半固体培养基接种法 贴上标签（姓名、学号、菌种等） 置37℃培养箱,培养18-24 h 下次实验课观察细菌的生长现象 二、细菌代谢产物的检查(示教) 1. 糖发酵试验 5. 吲哚试验 2. 硫化氢试验 3. 尿素分解试验 4. 色素产生 1. 糖发酵试验 培养基无颜色变化 — 培养基由紫色变为黄色 培养基由紫色变为黄色，小管顶端有气泡 + 接种细菌培养后 + 2. 硫化氢试验 穿刺线处呈黑褐色 无黑色沉淀物 “+” “—” 细菌分解含硫氨基酸 (胱氨酸和甲硫氨酸) 硫化氢(H2S) 铅或铁 硫化铅或硫化铁 3. 尿素分解试验 培养基由黄变红 培养基无颜色变化 “+” “—” 尿素酶 分解尿素产氨 4. 色素 脂溶性色素 色素局限于细菌本身 水溶性色素 菌体和培养基均有颜色 细菌分解色氨酸产生吲哚（靛基质） 滴加 3-5 滴 Kovac’s 试剂，轻轻摇动试管 观察表面有机溶剂层颜色变化 5. 吲哚试验 玫瑰红色 无玫瑰红色 + — 三、细菌代谢产物的检查(自做) 1. 过氧化氢酶实验（1份/组） 菌种：金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌 观察结果：哪种菌可产生过氧化氢酶 1分钟内 挑菌至玻片， 滴加3%过氧化氢 2. 氧化酶实验（1份/组） 菌种：肺炎链球菌、铜绿假单胞菌 取菌至滤纸（含氧化酶试剂：盐酸二甲基苯二胺） 观察结果：哪种菌可产生氧化酶 + — 四、非特异性免疫——溶菌酶实验(自做) 非特异性免疫 1.天然免疫、固有免疫 2.组织、细胞、分子 溶菌酶 1.小分子碱性蛋白质 2.体液：唾液、汗液、血液等 3.裂解细菌细胞壁肽聚糖分子间的β-1,4糖苷键 材料 1.含有溶壁微球菌的琼脂平板 2.打孔器、针头、移液器、枪头、平板 3.唾液标本（自取） 分组：每3人一组，每组1块平板 方法 1.在空平皿中收集唾液 2.在含溶壁微球菌的平板上打4个孔，用针头挑出孔内琼脂 3.每人分配1孔，在平板反面标记 4.用移液器加唾液和PBS，约15μl/孔 5.24-26℃培养18 h 下一次课观察结果，测量溶菌圈直径 生化反应 原理 现象 结果 糖发酵试验 + - 吲哚试验 + - 硫化氢试验 + - 尿素分解试验 + - 色素产生试验 脂溶性色素 水溶性色素 + 实验报告 记录过氧化氢酶实验结果 记录氧化酶实验结果 实验报告 * 基础培养基：含有多数细菌生长繁殖所需的基本营养成分，琼脂平板、斜面、肉汤 血琼脂培养基：营养培养基，特殊营养要求，特殊生长因子，加入脱纤