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第23届国际生物学奥林匹克竞赛试题实验1amp;#183;分子生物学和细胞生物学.pdf
2014 年第49 卷第6 期
60 生物学通报
第 23 届国际生物学奥林匹克竞赛试题
实验 1 .分子生物学和细胞生物学
王 健 1 李俊红 2 范六民 3 梁前进 1
(1 北京师范大学生命科学学院 北京 100875 2 中国科学院动物研究所 北京 100101
3 北京大学生命科学学院 北京 100871)
中国图书分类号:G634. 915 文献标识码:E
总分: 100 分时间:90 min 简介
遗传作图技术是目前在 DNA 片段顺序和特异
本次实验需要完成以下任务:利用限制性核
性分析工作中普遍使用的一项技术。在这项技术
酸内切酶切割 DNA 片段，并进行基因作图。
中，用多种不同的限制性核酸内切酶切割 DNA 后
A 部分 确定是否已将人类 DNA 插入到了
可以产生特定的 DNA 片段然后通过 DNA 凝胶电
1 个克隆质粒中(80 分)。
泳呈现出 DNA 片段的特异性。它在基因克隆、基
B 部分 确定 DNA 片段插入的方向(20 分)。
因功能和调节的研究、寻找疾病的候选基因，以及
材料、仪器设备
数量 单位
材料、仪器设备
疾病诊断和司法工作中起到非常重要的作用。
限制性核酸内切酶 RE1 (Ndel) ( 保存在冰上) 4 fL L 管 A 部分 确定是否已将人类 DNA 插入到了
制性核酸内切酶 RE2 ( EcoRl ) (保存在冰上) 管 1 个克隆质粒中
41儿L
运用这项技术确定已经将人类的基因片段
在酶缓冲液中的 DNA 待测样本(标有T 字样)
管
10μLx4
X( 约 760 bp) 插入到了 1 个克隆质粒或运载体
(在冰上)
V( 环状，约 2 570 bp) 中。你需要根据以下 DNA
miliQ 品牌的纯水(标有W字样) 管
温育和电泳步骤，设计和实施 DNA 切割实验。对
DNA凝胶电泳槽和电源 套
DNAT 和限制性核酸内切酶进行温育，然后进
微量移液器和装在盒子中的吸头(量程为 10μL
2 件
和 100μL)
行电泳。电泳结束后电泳结果将通过 DNA 染色
(染色过程由实验技术人员进行操作)显示出来，
秒表
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