米糠钙调素的分离纯化工艺探究.doc

米糠钙调素的分离纯化工艺研究 1、相关定义 1.1、低聚半乳糖的定义和来源 益生作用的认识增强,在功能性食品研究方面取得了十分 显著的成果。在碳水化合物类的产品中,功能性的低聚糖是最具有代表性的产品。低聚半乳糖 (Galactooli -gosaccharides,GOS)是当前国际上已经有所开发的功能性的低聚糖,受到了消费者 的青睐,并且已经很受重视。在生物界中,哺乳动物的乳汁中含有微量的 GOS,,母乳中含量略 多些。GOS 是一种具有天然属性的功能性低聚糖,它定义为乳糖的半乳糖一侧以 β(1-3)、β(1-4) 或 β(1-6)键结合 1-4 个分子的半乳糖的结合糖,分子式为(Gal)n-Glu,n=2-5。GOS 合成原理:在 具有半乳糖基转移活性的 β-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)的作用下,首先将乳糖水解成半乳糖和葡 萄糖,然后再将半乳糖转移到乳糖的半乳糖基上生成 GOS,生物化学合成过程如图 1-1 所示[1]。 图 1-1 乳糖水解过程合成低聚半乳糖机理 Figure 1-1 Synthetize mechanism of galactooligosaccharide during lactose hydrolysis 对于 GOS 的研究开发,日本、欧美等国家走在世界的前端,而我国的研究还在起步阶段。 当前,商品化的 GOS 是使用微生物酶法制造生产的,此法生产的 GOS 毒副作用的,是安全可靠 的,并且其产生的 GOS 的结构域母乳中的 GOS 的结构比较相似,其对于添加到食品和药品中都 是比较安全的[2]。用于生产 GOS 的 β-半乳糖苷酶的主要来源为:米曲霉(Aspergillus 1oryaze)、 黑曲霉(Aspergillus niger)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、雷特氏乳酸菌(Lactobacillus reuteri)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、及常见的乳酸菌,如两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)等[3-5]。陕西科技大学有研究使用米曲霉进行生产 β- 半乳糖苷酶来合成的 GOS,此反应的体系的 pH 为 6.0、合成温度为 55、加酶量为 40U/g、使 用 40%的乳糖为反应底物、合成时间为 32 h,最终的到 GOS 的制取率为 32.4%[6];山东大学通过 研究从巨大芽孢杆菌提取 β-半乳糖苷酶,在一定 pH 值和一定浓度乳糖溶液为合成底物的条件下, GOS 的得率为 25.68%[7];华南理工大学有研究使用海藻酸钠-明胶凝胶包埋的法制备固定化的 β- 半乳糖苷酶,其回收率最终高达 80%,当以 41.5%乳糖为合成的底物、当加酶量仅为 0.14%时、 合成时间为 0.95 h、反应的温度为 55时,试验的到 GOS 的得率为 41.4%[8];同时也报道了关于 进口米曲霉的低聚半乳糖的研究及 β-半乳糖苷酶制剂的合成,以及嗜热脂肪芽孢杆菌的转糖基 β 糖基半乳糖苷酶的性质和固定化及其产生的研究[9]。 制备所得 GOS 的种类及其数量是受酶源、反应底物及底物的浓度,酶对底物的水解率等一 系列的因素所影响的。对于酶的来源的不同,其酶法合成的 GOS 的特性具有较大的差别。酶的 来源相同,但是由于外在的因素,如金属离子的存在、底物的浓度、及其反应服务的 pH 值等因 1 素的影响,最终所合成的 GOS 可能也有所不同,这可能是由于酶对底物中的糖苷键的连接具有 特异性。低聚半乳糖的类型主要有两种,分别 β-低聚半乳糖和 α-低聚半乳糖。 1.2 低聚半乳糖的理化性质[10] 低聚半乳糖作为我国一种新开发的产品,具有天然属性的功能性,由于它生理活性比较特殊, 因此较快地被食品生产商和消费者所关注,具有很广阔的市场前景。低聚半乳糖有很多的功能特 性,首先它具有低能量的特性;第二它与龋齿的预防、便秘的缓解、降血压、降低胆固醇等身体 健康方面的问题息息相关;第三它还具有耐酸耐热等特性。当前的低聚半乳糖制品主要包括一些 保健品、乳制品以及婴幼儿食品 ,关于低聚半乳糖的安全性问题,我国卫生部已于2008年第20 号公告批准低聚半乳糖为新资源食品,指出低聚半乳糖是食品中一种重要的功能性添加剂, 相关部门已经规定了相应的使用标准,见表1-1[11]。 表 1-1 低聚糖摄食量比较 Table 1-1 Comparison of oligosaccharides feeding amount 低聚糖名 最小有效剂量(g/d) 日常摄取量(g/d) 最大无作用量(g/d) 1 低聚半乳糖 2 10 18 2 低聚异麦芽糖 10 15 90 3 低聚果糖 3