绵羊骨髓间充质干细胞地分离培养及鉴定试验.doc

绵羊骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定试验 1、相关定义 1.1、NSCs 的定义及基本特性 神经干细胞( neural stem cells,NSCs):是一种潜能性细胞,能够自我更 新,是在成年动物中枢神经系统内主要的细胞类型。NSCs 的基本特征:(1)神经 干细胞具有多向分化的潜能,可生成神经系统内各种类型细胞,并具有分化成 熟的后代细胞的能力,其主要包括神经系统内存在的三类主要细胞如:神经元、 少突胶质细胞和星形胶质细胞。目前关于 NSCs 多向分化潜力性研究有了新的 认识,通过一系列试验及实验表明 NSCs 具有很强的多向分化潜能,可以跨系 或跨胚层,比如:NSCs 在一定条件下,可以分化为造血细胞并有效的重建造血 系统,NSCs 也可以向肌细胞分化等,因此,我们可将 NSCs 看作为具有神经多 向分化潜能的干细胞。(2)具有自我维持和更新能力(维持和更新能力是指在 某一确定部位保持稳定的数量,和/或在必要时进行增殖的能力):NSCs 通过两 种分裂方式来达到增殖的目的:即不对称分裂和对称分裂;对称分裂后,细胞 可产生两个,分别为:干细胞或两个祖细胞( progenitor cell) ,干细胞和 祖细胞是两个相对的细胞,祖细胞,自我维持,分化和更新能力受到相应的限 制,仅具有单潜能或双潜能分化能力或其干细胞样特征只能维持相对较短的时 7 长春中医 大学 2014 硕士学位论文 文献综述 间;而不对称分裂分别产生一个新的干细胞和新的祖细胞,祖细胞存活时间相 对比较短,增殖后一部分发生迁移分化另一部分则死亡,因为干细胞则分化较 为缓慢,所以维持干细胞库并且使其稳定的同时,相应的产生一些祖细胞以补 充丢失死亡的同类细胞。 神经前体细胞 一词,往往被一些学者教授用来代 替干细胞及祖细胞两个不同阶段的细胞,前体细胞(precursor cell)是指在生 长发育过程中他的出现比另一种细胞要早且属于前一阶段细胞。 1.2、表皮干细胞的概念及生物学特性 有多种分化潜能,具有自我更新能力和高增殖能力 的细胞〔习。按分化潜能的大小,干细胞可分为三种类型〔:t]:一类是全能性干细胞, 它具有形成完整个体的分化潜能,如胚胎干细胞;另一类是多能性干细胞,这种 干细胞具有分化出多种细胞组织的潜能,但却失去了发育成完整个体的能力,发 育潜能受到一定的限制,如骨髓多能造血干细胞;第三类为单能干细胞(也称专 能、偏能干细胞),这类干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分 化,如上皮组织基底层的干细胞、肌肉中的成肌细胞或叫卫星细胞。从发生机制 来看,干细胞并不直接分化产生终末分化细胞,而是先分化成短暂扩充细胞 (t ransit ampl ifying CellS TAC),这种细胞有产生定向分化成某种终末分化细 胞的能力,因而是定向祖细胞(CommittedprogenitorS)。短暂扩充细胞再经过几 次到十几次不等的分裂后定向分化,进一步可分化为有丝分裂后细胞(p。St- mitotiC CellS)及终末分化细胞(termi。ally一differentiated CellS)。 20世纪80年代初,BICkenbaCk以细胞标记滞留技术发现了鼠表皮中含有一 细胞群落,可持续探测到其放射活性达280天,故命名为表皮干细胞。表皮位于皮 肤的最外层, 为基底细胞、 主要是由人表皮角蛋白形成细胞组成,角蛋白形成细胞由内向外依次 棘细胞、颗粒细胞、透明细胞和角质细胞。其中 最内的基底膜上,形成基底层,是人角蛋白形成细胞的生发层。 ,基底细胞位于表皮 基底细胞包括表皮 暨南大学 表皮干细胞的分离培养及蛋自组学研究 干细胞、短暂扩充细胞和终末分化细胞。此后研究表明,人和鼠的皮肤中约100/0的 基底层细胞为慢周期细胞,这些细胞在体外培养条件下仅有约40%可形成大的克隆, 也就是说基底层细胞中只有40k为表皮干细胞〔5,6〕。动力学分析表明,表皮分两部分: 增殖部分和非增殖部分,其中,增殖部分由基底细胞和棘细胞组成。业己证明,大 部分能分裂增殖的细胞都粘附于基底膜上,当它们离开基底层后便不再分裂,经历 终末分化,并且向皮肤表面移行,最终形成复层鳞状上皮,以避免下面活细胞层水 分丢失和机械损伤。这样,角质细胞持续不断更替脱落,然后又由基底层的细胞持 续地增殖分裂更替。而非增殖部分由透明层,颗粒层和角质层细胞组成,这部分所 有的细胞都不具有增殖能力,细胞成熟和细胞凋亡并不伴有新细胞产生。所有能够 自我更新的组织都有干细胞,这些细胞长存,有强大的增殖分化潜能,有助于细胞 更替。位于表皮基底层的干细胞属于专能干细胞,它最终分化为角质化细胞。随着 发育生物学的发展,人们对表皮干细胞在伤口愈合中的作用得到充分的认识。在人 体不同部位皮肤更新周期约为2一4