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狂犬病毒实验室检测方法综述 陈晶，刘晓慧，孙招金 (华南农业大学兽医学院，广东广州510462) 摘要：狂犬病是迄今为止人类病死率最高的急性传染病，一旦发病，死亡率几达100％．狂犬病毒感染 的早期诊断，为有效预防和控制狂犬病提供基础。本文就几种敏感有效的狂犬病实验室诊断方法进行综述． 关键词：狂犬病毒：检测；试验 中图分类号：R373．9 文献标识码：A 狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的人兽共患 相比具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，逐 传染病，OIE将其列为B类疫病。我国狂犬病发病 渐被广泛应用，作为检测新鲜组织中狂犬病病毒抗 死亡人数仅次于印度，为世界第二，从1950年至 原的标准方法和首选方法。 2005年，我国狂犬病共出现了5次流行高峰，前4 2常用的实验室诊断技术 次高峰约每10年流行一次，流行范围几乎遍及全 由于狂犬病毒几乎可以感染所有的温血动 国。从近年来的流行情况看，第5次高峰正在形成， 物，所以狂犬病毒的实验室诊断首要是考虑安全 而且增长趋势仍在继续。据卫生部统计表明，包括 问题，怀疑感染狂犬病的动物不能随便解剖，应送 “非典”疫情发生的2003年在内，狂犬病的死亡人地方有关部门进行鉴定。实验室在接到怀疑感染 数在我国法定报告传染病中始终占据首位，狂犬病 该病毒的动物时，一定要在P3以上条件专业实验 已成为严重危害我国公共卫生的重大疫病。据报 室进行操作，并且实验室人员必须做好技术上的 道，1980—1999年狂犬病累计死亡总数已高达10 准备方可进行接下来的工作。WHO专家目前认可 万人以上。因此，对该病检测方法的研究可为控制 的检测方法有小鼠中和试验和快速荧光抑制试验 狂犬病在我国的流行提供技术保障。本文对狂犬病 (RFFIT)等。这两种方法均针对狂犬病疫苗免疫 实验室诊断的常规技术进行了浅述，包括FAT、 后血清中和抗体的检测。随着科学技术的发展，实 RT—PCR、TaqMan试验，从敏感、快速、简便等几方面 验室也应用了越来越多的方法检测狂犬病毒。 进行比较，为狂犬病实验室诊断提供参考。 2．1 荧光抗体方法(FAT)在诊断狂犬病常规方 1 实验室诊断依据 法中，FAT法是WHO和OIE共同推荐的方法。该法 临床症状是诊断人和动物狂犬病的重要依据， 可直接检测涂片，也能用于检测细胞培养或被接 但单凭临床表现还不够，还需通过狂犬病病毒的实 种小鼠的脑组织中狂犬病病毒抗原是否存在“】。 验室检测才能确诊人和动物狂犬病。1903年， 自1950年被引用以来，在全球范围内被广泛应用 Adolchi 于狂犬病的诊断，该方法既灵敏、特异性又高，应用 Negri在狂犬病病毒感染组织细胞浆内 发现了嗜酸性包涵体一内基氏小体，后被命名为 价值非常高。对于新鲜病料，FAT法可在几小时内 得出可靠结果，准确率达95％一--99％。与其它任何检 Negri小体。从此，Negri小体被认为是狂犬病病毒 感染的特征性病变，将检测Negri小体作为狂犬病测方法一样，FAT法的可靠性取决于样品性质(如 的确诊方法持续了几十年【l】。随着实验室诊断技术 动物种类和自溶程度)、狂犬病病毒(或狂犬病病 的不断发展，许多研究报道狂犬病病毒的感染并非 毒相关病毒)和操作人员的熟练程度【3]。FAT法的 总会出现Negri小体。自病毒分离技术出现后，发特异性和灵敏度，部分程度上依赖于亲和力、梯度 现在狂犬病病毒感染的组织出现Negri小体的检及特异