赵虎：非培养方法快速检测微生物.pdf

非培养方法快速鉴定微生物 非培养方法快速检验病原微生物 复旦大学附属华东医院 赵 虎 2012-10-13 非培养方法快速鉴定微生物 一、病原微生物 检验的概述 （一）感染性诊断的金标准 非培养方法快速鉴定微生物 细菌感染：分离、培养和鉴定 明确是否有感染——诊断金标准 明确病原菌种类——致病性强弱 体外药敏分析 ——治疗的依据 其他微生物： 病原体的抗原成分 病原体的核酸成分 （二）细菌检验的现状 非培养方法快速鉴定微生物 培养鉴定时间长 阳性检出率低（假阴性） 气体环境（厌氧、微需氧等） 营养条件（苛养菌、特殊细菌等） 渗透压（L型细菌） 标本采集、运输和保存条件 假阳性率高 污染——无菌操作不彻底 定植——细菌寄生 （三）快速鉴定方法 非培养方法快速鉴定微生物 直接染色镜检 免疫学方法 分子生物学方法 质谱方法 其他快速方法 非培养方法快速鉴定微生物 二、涂片染色镜检 （一）革兰染色 非培养方法快速鉴定微生物 判断标本是否合格（痰标本） 判断有无细菌或其他微生物存在 判断细菌大概的数量 将细菌分为革兰阳性和阴性两大类 提供进一步鉴定的依据 提供临床经验用药的依据 特殊细菌可作为初步诊断的依据 - 淋病——细胞膜G 双球菌，肾形排列 化脓性脑膜炎——G-双球菌，矛状排列 （二）抗酸及其他染色 非培养方法快速鉴定微生物 抗酸染色——分枝杆菌 墨汁负染——细菌荚膜 鞭毛染色——细菌鞭毛 …… 非培养方法快速鉴定微生物 三、临床免疫学方法 （一）血清凝集试验 非培养方法快速鉴定微生物 应用于细菌分型和鉴定 沙门菌 志贺菌 霍乱弧菌 致病大肠埃希菌 …… （二）酶联免疫技术 非培养方法快速鉴定微生物 酶联免疫技术是将酶与抗体通过化学或物理的方法 结合起来，抗体与目标抗原反应后，连在抗体上的酶发 生一系列的酶促反应，使抗原得到很好的辨认。酶联免 疫技术的应用，太大提高了检测的敏感性和特异性，现 已广泛地应用在病原微生物的检验。优点是检测灵敏度 高，速度快。 生物梅里埃公司的Vidas或mini-Vidas全自动免疫分析仪 沙门菌 大肠埃希菌O157:H7 单核细胞李斯特菌 空肠弯曲菌 葡萄球菌肠毒素 （三）磁免疫技术 非培养方法快速鉴定微生物 磁免疫技术是将抗体固定在磁珠上， 抗体与目标抗原特异反应后，通过外 加的磁场，使携带抗体抗原的磁珠富 集起来，并且与非目标菌分离，简化 了目的菌的分离和鉴定。此技术灵敏 度和特异性较强。 产单核细胞李斯特菌 （四）其他免疫学技术 非培养方法快速鉴定微生物 放射免疫技术 荧光免疫技术 化学发光技术 生物发光技术 …… 全血 干扰素( IFN- )测定试验 非培养方法快速鉴定微生物 γ γ 用于检测细胞内寄生的细菌——结核分枝杆菌（MTB）