芯片自由流梯度电场电泳及其应用 - 中国科学.pdfVIP

中国科学 B 辑 :化学 2009 年 第 39 卷 第 9 期 : 904 ~ 909 SCIENCE IN CHINA PRESS 芯片自由流梯度电场电泳及其应用 * 王平利, 张丽华, 梁振, 张玉奎 国家色谱研究分析中心; 中国科学院大连化学物理研究所; 中国科学院分离分析化学重点实验室; 大连 116023 * 通讯作者, E-mail: lihuazhang@ 收稿日期：2009-05-30; 接受日期：2009-06-19 摘要 尽管在垂直的电场和流体场作用下, 采用芯片自由流电泳(μ-FFE)可实现样 关键词 品的连续微分离和制备, 但是由于在运行过程中, 存在分析物的区带展宽问题, 会 芯片自由流电泳 直接影响样品的分离效果. 在本文中, 在施加固定电压的情况下, 通过向和分离缓 梯度电场 冲液相同的电极缓冲液中添加硫酸钠的方法, 在分离腔内形成了梯度电场. 通过对 分离富集 染料 罗丹明B 和甲基绿混合物的分离发现, 在均一电场下, 施加400 V 分离电压, 混合物 蛋白质 需2 min 才能完全分离; 甲基绿的区带宽度为3.8 mm, 与罗丹明B 的分辨率是3.2. 在向电极缓冲液中添加5 mmol/L 硫酸钠形成的电场梯度下, 施加300 V 的分离电 压, 两种染料可在10 s 内完成分离; 在20 s 时, 甲基绿的区带宽度被压缩到0.5 mm, 检测灵敏度提高了7 倍以上; 与罗丹明B 的分辨率可达到16.2. 此外, 该方法还被用 于牛血清白蛋白的富集. 与施加均一电场相比, 蛋白质的检测灵敏度得到了显著提 高. 上述结果表明, 通过在μ-FFE 中引入梯度电场, 可有效提高样品的分辨率、检测 灵敏度和分析速度. 1 引言 电场梯度聚焦是由 Koegler 和 Ivory 在 1996 首次提出 [10] 的一种可同时实现样品分离富集的分 自由流电泳(free flow electrophoresis, FFE) 是 Hanning等人[1] 于 1960s提出的一种连续的电泳分离 析方法. 从梯度形成的本质可分为三类：浓度梯度、 技术. 与传统凝胶电泳和毛细管电泳相比, FFE可通 温度梯度和数控电压梯度. 浓度梯度主要通过在分 过对样品的连续进样和分离, 实现目标组分的制备. 离通道截面逐渐减小, 并在通道周围制作离子可透 然而采用商品化的FFE仪器, 通常样品的处理量较大, 过性膜[10,11~14] 以及通过混和器在分离通道内形成浓 分析时间较长. Manz 等人在 1994 年首次在芯片上实 度梯度[15]. 沿分离通道形成温度梯度, 选择导电性随 现了芯片自由流电泳(μ-FFE)[2], 有效地解决了传统 温度变化的离子做缓冲盐, 在相同缓冲盐浓度下, 沿 FFE存在的问题. 分离通道形成电场梯度[16,17]. 数控电压梯度[18] 是在 目前μ-FFE有多种分离模式, 如区带电泳[2~5] 、等 分离通道内设计一组电极阵列, 每个电极的电压可 [6~8] [9] [5,9] 单独控制, 施加不同的电压, 在分