NMDA受体活化Ca2%2b信号传导通路RBMECs高表达P-gp中的机制初探.pdf

复旦大学博士论文 中文捕要 第二部分 谷氨酸诱导NMD^受体活化信号通路中关键调控因子的活化检测 目的：检测谷氨酸信号传导通路关键调控因子及其下游转录或延长因子的活 化程度，进一步研究耐药调控机制，并选取合适的实验干预位点。 方法：选取新生卜2天Wistar大鼠，保留脑微血管内皮细胞，并以高糖 Control对照组，以Western 酸化水平、NF—KB表达水平，ELISA法检钡IJNF-KB(p65)活化程度。 结果：Glu+PBS组6h、24h、72h 5min、lh 点eEF一2K表达水平均低于Glu+PBS组，5min、lh、3heEF一2磷酸化水平亦低于 B(p65) 水平较对照组明显增高。MK80l+Glu组1h、3h时间点NF-KB(p65)活化水平仅略 低于Glu+PBS组，而6h、24h时间点NF—KB表达水平略高于Glu+PBS组。 受体进行干预可能通过下游激酶eEF一2K及延长因子eEF一2参与对P—gp的表达调 控。谷氨酸NMDA受体活化增加NF-KB活化水平，提示NF—KB的活化可能参与 B活化水平增高， NMDA受体激活引起的P—gp表达增高。MK801未明显影响NF—K 提示NMDA受体抑制剂可能无法终止NF-KB的活化。 4 万方数据 复旦大学博士论文 中文捕要 第三部分 eE卜2K干预剂对谷氨酸诱导R叫ECs高表达P-印的调控作用及其 机制研究 路上下游同时进行阻断对P—gp表达水平的影响。 方法：选取新生1-2天Wistar大鼠，保留脑微血管内皮细胞，并以高糖 bmRNA转录水平，WesternBlot法检测eEF一2 以RT-qPCR法检测Mdrla、Mdrl 表达水平、磷酸化水平及P—gp表达水平。 结果：1umol／L mRNA相对表 略低于Ⅷ(801+glu组。NHl25+MK801+Glu组5min、lh、3heEF-2磷酸化水平较 I慨801+Glu明显降低。 1 u 结论：NHl25 eEF-2磷酸化水平，较完全抑制谷氨酸刺激RBMECs高表达P-gp的效应。 万方数据 复卫大学博士论文 中文捕要 结 论 1．创建了谷氨酸RBMECs诱导P-gp高表达的体外模型。 平的升高以及P-gp高表达，提示NMDA受体活化后可能通过 Ca2+_CaM-eEF-2K—eEF一2信号通路参与P—gp表达调控。 信号通路的关键激酶以及延长因子，达到对P-gp表达的调控。 4．谷氨酸NMDA受体活化增加NF—KB活化水平，给予NMDA受体抑制剂MK801 未明显影响NMDA受体活化所引起的NF—KB活化水平增高，、提示NMDA受体抑制 剂可能无法终止NF—KB的活化。 5．NHl25能显著降低谷氨酸刺激RBMECsP-gp高表达模型中P—gp的表达水 平。 eEF一2磷酸化水平，进而可能对P—gp表达进行调控。 降低eEF-2磷酸化水平，抑制P—gP高表达效应。