一氧化氮对小鼠卵母细胞体内成熟、体外受精、早期胚胎发育及着床的影响.pdfVIP

遵义E掌院项_士研冀l生毕业诧。丈 材料与方法 1-材料 1．1动物 实验用清洁级性成熟昆明小白鼠，5～6周龄，体重25—309，由贵阳医学院动 物实验中心提供，许可证号SCXK(黔)2002—0001，自由采食，室温饲养。 1．2试剂及仪器 1．2．1主要试剂： 试剂名称： 生产厂家： 北京双鹤药业股份有限公司 nitroprusside，SNP) 硝普纳(sodium 武汉博士德公司 多聚赖氨酸(Poly—L—lysine) 台盼蓝 上海试剂三厂 1．2．2主要仪器： 仪器名称： 生产厂家： 体视显微镜 Olympus(Et本) 倒置显微镜 Olympus(日本) 电热恒温水箱 北京医用设备厂 离心机 上海安亭科学仪器厂 医用冰箱 SANYO(H本1 切片机 Leica(德国) 烤片机 天津航空工程公司 电热恒温干燥箱 上海跃进医疗器械厂 微波炉 Haier(中国海尔1 1．2．3器械： 眼科剪、眼科镊。 6 遵义E掌院硕±研蔓l生牛■：论’丈 2．实验方法 2．1小鼠子宫内膜胚胎着床点计数及测量 当日晚上8：00将雌雄小鼠以2：l台笼过夜，次日清晨7：00观察雌鼠阴道口， 发现白色阴栓者定为妊娠第l天(d1)。选取妊娠小鼠40只，随机分为实验组和 对照组，实验组又分为3个亚组(每组各10只)，于妊娠第3天(d3)分别腹腔 待小鼠口周、眼球、耳缘等部位呈蓝色时，颈椎脱臼法处死小鼠，开腹，取出子 宫，并将其以白色背景为底色自然平展，观察、计数胚胎着床点并照相。 2．2小鼠子宫内膜组织学观察 2．2．1载玻片及盖玻片的处理：清洁剂浸泡过夜，自来水冲洗；2％盐酸煮沸 30分钟，自来水冲洗，晾干；重铬酸钾浓硫酸清洗液浸泡24小时，蒸馏水充分 洗净，烘干，95％酒精内保存；多聚赖氨酸推片，室温下晾干备用。 2．2．2组织切片：子宫内膜经10％Ha醛固定18h，石蜡包埋，连续切片5张 (厚度3微米)，按顺序捞片，依次编号。 2．23脱蜡及水化：二甲苯I中脱蜡10分钟，在二甲苯II中脱蜡5分钟；无 水乙醇中处理1分钟×2次，梯度乙醇(95％、85％、75％、50％)中各处理5 分钟，最后在三蒸水中浸泡5分钟。 2．2．4 HE染色：苏木精染色3分钟，自来水冲洗1分钟；l％盐酸酒精分化 20秒，自来水冲洗1分钟，1％氨水蓝化30秒，自来水冲洗，伊红染色30秒， 自来水冲洗。 2．2．5脱水、透明及封片：梯度乙醇(85％、90％、95％、无水乙醇)中脱水， 二甲苯透明，中性树胶封片。 2．2．6子宫内膜组织形态学观察 每张切片在在100倍视野下随机观察5个视野，计数腺体数和血管数。 2．3数据处理 所有数据以均值±标准差(；±s)表示，应用SPSS 11．5统计软件对数据进 行统计学分析，多组闯样本均数比较采用方差分析，P0．05为差异有显著性。。 遵义E掌院硕_士研竞．生毕业诧。丈 3．结果 3．1不同剂量SNP对小鼠胚胎着床的影响