山葡萄论文：山葡萄两个ICE1同源基因克隆与表达特性研究.docVIP

山葡萄论文：山葡萄两个ICE1同源基因的克隆与表达特性研究 【中文摘要】低温是限制植物分布与生长的重要环境因素,而且低温冻害是全球农林业普遍存在的自然灾害,给全世界农林业造成了巨大的损失。随着分子生物学技术的发展,寒害研究已经深入到分子水平,从而促进植物抗寒基因工程的发展。本试验以山葡萄为材料,采用电子克隆技术从山葡萄EST数据库中拼接到两个ICEl基因,应用户RT-PCR扩增得到两个基因编码区全长序列,分别命名为VaICEla和VaICE1b。结果如下：VaICE1a基因的cDNA全长为1617bp,根据核苷酸推导出的氨基酸序列分析表明它由538个氨基酸组成,命名为VaICE1a。cDNA序列和编码的蛋白序列结果显示其含有一个富s区、核定位信号区(NLS)、转膜区。山葡萄VaICEla基因与欧洲葡萄(XP-002275711)、苹果、毛果杨、欧洲葡萄(XP-002284528)、拟南芥、小麦的同源性分别为99%、61%、62%、64%、60%、76%。该序列在C端高度保守,具有ICE基因典型的BHLH结构域。系统发育分析将VaICE1a基因归入ICEl进化系。三级结构分析表明ValCEla为混合型蛋白。上述结果表明VaICE1a可能为ICEl基因家族的一个新成员。半定量PCR结果表明VaICE1a在山葡萄的不同组织部位均不同程度的表达,在四种非生物逆境胁迫下VaICE1a基因能够诱导表达,与对照组比较表达量没有明显差别。VaICE1b基因的cDNA全长为1653bp,根据核苷酸推导出的氨基酸序列分析表明它由550个氨基酸组成,命名为VaICElb。山葡萄VaICE1b基因的cDNA序列和编码的蛋白序列结果显示其含有一个富s区、核定位信号区(NLS)、转膜区。通过blast分析发现山葡萄VaICElb基因与欧洲葡萄(XP-002275711)、苹果、毛果杨、欧洲葡萄(XP-002284528)、拟南芥、小麦的同源性分别为64%、68%、68%、99%、、52%、73%。该序列在C端高度保守,具有ICE基因典型的BHLH结构域。系统发育分析将VaICE1b基因归入ICE1进化系。三级结构分析表明VaICE1b的为混合型蛋白。上述结果表明VaICE1b可能为ICEl基因家族的一个新成员。半定量PCR结果表明VaICE1b在山葡萄的不同组织部位均不同程度的表达,在四种非生物逆境胁迫下VaICE1b基因均能够诱导表达,与对照组相比表达量相对较高。成功构建了VaICEla和VaICElb基因的植物双元表达载体。 【英文摘要】The low temperature is limiting important environmental factor of geographical dist of plants and growth, moreover the low temperature freeze injury is the global agriculture forestry universal existence natural disaster, has created the massive loss for the world agriculture forestry. Along with the molecular biology technology抯 development, the winter-killing research already penetrated into the molecular level, thus promotion cold resistant of plant genetic engineering development.This experiment take the amur grape as material,Two ICE1 genes were isolated from Vitis amurensis Rupr.by bioformatic analysis and RT-PCR. named as VaICE1a and the VaICE1b gene. The result is as follows:VaICE1a gene cDNA span is 1617bp, according to the nucleotide analysis that it was composed 538 amino acids, named VaICE1a. The cDNA sequence and the code protein sequence showed that it includes a rich s area, the nucleus localiza