第二胚层决定.pdf

第三课 早期发育的过程与机制 ——第二胚层决定与相关的 干细胞 内容提要  Sox2，Nanog与早期发育  第二胚层决定的分子机制  发育过程中相关的干细胞  DNA甲基化与发育 Sox2 (SRY-related HMG-box gene 2)  属于SOX蛋白质家族，通过79个氨基酸的 HMG （high mobility group)结构域与DNA结 合。  最早表达的干细胞多能性相关基因之一，在 维持干细胞多能性和种系特性方面起到非常 关键的作用。  在植入前胚胎的ICM、ES细胞、EC细胞和生 殖细胞上，SOX2和Oct4共表达。 Sox2 expression in early embryo development Sox2蛋白在整个植入前期都存在 Sox2蛋白在晚期囊胚中主要表达在ICM Sox2 mRNA在囊胚和植入后的分布 6.5-dpc 7.5-dpc 7.5-8.0 dpc A.Sox2在囊胚中主要分布在ICM；B. 6.5dpc, Sox2主 要分布在原始外胚层和胚外外胚层；C D. Sox2主要 分布在绒毛膜c和神经外胚层Ne 8.5-dpc 9.5-dpc E. Sox2主要分布在绒毛膜c和头褶headfold, Hf; F. 9.5dpc, Sox2主要分布在神经管. Sox2βgeo HT 杂交后代分析 Sox2βgeo杂合小鼠能够存活，但雄性生育 率明显下降；虽然Sox2敲除的胚胎能够 发育到囊胚阶段，但很快在植入后死亡 缺少Sox2蛋白的囊胚虽然外型和野生型类似， 但在体外培养中ICM不能正常生长，只能形成 类似Oct4缺乏时的滋养层细胞。 Sox2βgeo杂合子杂交后代 胚胎分析，发现缺乏 Sox2的胚胎缺乏外胚层。 H19是胚外标记 Oct4是外胚层标记 Evx1是脏壁内胚层VE标记。 Sox2与早期胚胎发育  Sox2缺乏的胚胎植入异常，并很快在植入后 6.0dpc死亡，显示紊乱的胚外组织和缺乏 Oct4阳性的外胚层细胞。  从Sox2突变囊胚中分离的ICM转变为滋养外 胚层和内胚层表型。 Nanog-概述  2003年，Chambers等和Mitsui等分别在ES细胞内发现并 报道了一个新的转录因子，该因子可维持ES细胞的自我更 新及全能性，被命名为Nanog。  Nanog基因属于同源盒基因。其同源域home-odomain在 不同品系小鼠中有94% 同源，在不同人种中有87% 同源， 小鼠和大鼠、小鼠和人之间各具有94%和87%的同源性。 Nanog-结构  小鼠Nanog蛋白由305个氨基酸构成，包含同源域 HD、N端和C端等3个区域。其中同源域是蛋白质和 DNA的结合区域，N端富含苏氨酸和丝氨酸，可能 参与磷酸化作用，C端含有W重复序列。 Nanog在植入前胚胎中的表达 Nanog最早出 Nanog在囊 现在紧束化桑 胚中主要 椹胚中 表达在ICM Cell, 113(5): 643-655, 2003 Nanog-null embryos 囊胚体外培养10天