肠道病毒分离技术.pdf

肠道病毒分离技术 肠道病毒分离技术 国家脊髓灰质炎实验室 王东艳 国家脊髓灰质炎实验室 王东艳 2008-4-9 2008-4-9 用于病毒分离和鉴定标本的种类 用于病毒分离和鉴定标本的种类 用于病毒分离和鉴定标本的种类 用于HFMD病毒分离的标本包括粪便、 用于HFMD病毒分离的标本包括粪便、 用于HFMD病毒分离的标本包括粪便、 咽拭子和疱疹液，如果患者出现神经系 咽拭子和疱疹液，如果患者出现神经系 咽拭子和疱疹液，如果患者出现神经系 统症状，可以采集脑脊液标本。 统症状，可以采集脑脊液标本。 统症状，可以采集脑脊液标本。 用于AHC病毒分离的标本主要是结膜拭 用于AHC病毒分离的标本主要是结膜拭 用于AHC病毒分离的标本主要是结膜拭 子或结膜刮取物。 子或结膜刮取物。 子或结膜刮取物。 1.粪便标本的处理 1.粪便标本的处理 1.粪便标本的处理 A ）所需试剂和耗材： AA ））所需试剂和耗材所需试剂和耗材：： 15ml或50ml耐氯仿离心管； 1515mlml或或5050mlml耐氯仿离心管耐氯仿离心管；； 1ml 或5ml吸氯仿用的玻璃吸管； 11mlml 或或55mlml吸氯仿用的玻璃吸管吸氯仿用的玻璃吸管；； 5ml和10ml吸管； 55mlml和和1010mlml吸管吸管；； 木制便签； 木制便签木制便签；； 外螺旋盖的冻存管 （5ml）； 外螺旋盖的冻存管外螺旋盖的冻存管 （（55mlml）；）； 直径大约2~3mm的玻璃珠； 直径大约直径大约2~32~3mmmm的玻璃珠的玻璃珠；； 混有抗生素的完全PBS 混有抗生素的混有抗生素的完全完全PBSPBS 氯仿 （以乙醇作为稳定剂）。 氯仿氯仿 （（以乙醇作为稳定剂以乙醇作为稳定剂）。）。 注意：完全PBS及氯仿的作用。 注意注意：：完全完全PBSPBS及氯仿的作用及氯仿的作用。。 b)粪便标本处理操作步骤：生物安全柜中操作 b)粪便标本处理操作步骤：生物安全柜中操作 b)粪便标本处理操作步骤： 将离心管上标记标本号; 将将离心管上标记标本号离心管上标记标本号;; 每一管中加入10ml 完全PBS ，2g玻璃珠，1ml氯仿; 每一管中加入每一管中加入1010mlml 完全完全PBSPBS ，，2g2g玻璃珠玻璃珠，，11mlml氯仿氯仿;; 在生物安全柜中将每一份粪便标本取大约2g加入标记好 在生物安全柜中在生物安全柜中将每一份粪便标本取大约将每一份粪便标本取大约22gg加入加入标记好标记好 的离心管中 （确认原始标本号与离心管上标记的编号 的离心管中的离心管中 （（确认原始标本号与离心管上标记的编号确认原始标本号与离心管上标记的编号 一致），剩余原始标本最好留在原容器中并冻存于- 一致一致），），剩余原始标本最好留在原容器中并冻存于剩余原始标本最好留在原容器中并冻存于-- 20℃。 2020℃℃。。 拧紧离心管，用机械震荡器剧烈震荡20分钟。 拧紧离心管拧紧离心管，，用机械震荡器剧烈震荡用机械震荡器剧烈震荡2020分钟分钟。。 用冷冻离心机离心1500g* （约3500转）20分钟。  用冷冻离心机离心1500g* （约3500转）20分钟。 用冷冻离心机离心1500g* （约3500转）20分钟。 将每一份标本上清吸入2个有外螺旋盖的标记好 将每一份标本上清吸入2个有外螺旋盖的标记好 将每一份标本上清吸入2个有外螺旋盖的标记好 的冻存管中 （若上清不清澈，应再用氯仿处理 的冻存管中 （若上清不清澈，应再用氯仿处理 的冻存管中 （若上清不清澈，应再用氯仿处理