紫外线B照射供体脾细胞预输注对异体神经移植影响的研究.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文 紫外线B照射的供体脾细胞预输注 对异体神经移植影响的研究 ．▲上-—Jo 刖 吾 长期以来，周围神经损伤的修复对于骨科医务工作者都是一个难题。临床上，用于治 疗周围神经损伤尤其是长段损伤或缺损的方法中，自体神经移植术仍是最可靠的治疗手 段，但是供区神经功能损失及可供缝合神经长度及直径有限是不可克服的缺点。硅胶管等 各种合成材料和自体骨骼肌、静脉等生物源性材料可引导神经再生，但其结构与神经基底 膜不同，轴突再生欠佳，临床应用价值不大，同种异体神经移植可克服上述缺点，但存在 排斥反应问题。 在临床器官移植中，移植排斥反应是导致移植失败的主要原因之一。移植后免疫排斥 反应是临床器官移植难以避免的问题，其根本原因是供体含有受体缺乏的移植抗原。当前， 临床器官移植主要通过免疫抑制剂来抑制移植后排斥反应的发生。但是，抗排斥反应药物 的长期应用可能会造成自体的器官和移植的器官发生难以控制的药物性损害，诸如感染、 肿瘤、药物毒副作用所致的器官功能损害等并发症的出现，因而极大地限制了临床器官移 植工作的开展。因此，如何提高移植器官的长期存活率己成为临床器官移植工作的当务之 急。自从免疫耐受现象发现以来，人们不断地试图通过诱导受者产生免疫耐受来提高移植 物的长期存活率，并在这一领域进行了长期不懈的尝试和探索。所以，设法诱导受体对移 植供体产生免疫耐受，是解决移植后排斥反应的最佳手段。 免疫耐受是指机体免疫系统在接触某种抗原后所产生的对该抗原的特异性免疫无应 答状态。根据诱导免疫耐受形成途径的不同，可划分为中枢耐受和外周耐受两种。前者经 胸腺选择形成，后者是淋巴细成熟并进入外周组织后发生的，主要是通过耐受原诱导淋巴 细胞产生凋亡而形成。免疫耐受发生的确切机制目前还不清楚，其中具有抗原提成的细胞 不少的实验研究已经证实利用APC(供体来源或受体自身)能够成功诱导出耐受现象。根 据供体含有受体缺乏的移植抗原是引起移植排斥反应发生的根本原因这一理论，目前诱导 免疫耐受产生的具体方法主要包括用供体免疫应答的不同环节，采用多途径、多步骤的方 式来降低免疫系统对移植物的排斥反应，或使受体达到“接近耐受的状态，由此减少器 官移植后抗排斥药物的使用，减少并发症的出现，延长移植物的存活时间，是可行的和有 效的方法。 由于在临床器官移植中开展外周静脉耐受诱导的研究具有可行性，因此，我们试图在 大鼠周围神经移植模型中，观察经尾静脉输注脾细胞后诱导受者产生免疫耐受的情况，为 临床开展器官移植诱导免疫耐受的工作提供参考的线索。 材料与方法 1．1 供 1．2主要试剂和实验设备： 显微手术器械：上海康捷医疗用品总厂 PE标记的大鼠CD4单克隆抗体和FITC标记的大鼠CD8单克隆抗体 。(美国BD公司)； 淋巴细胞分离液(天津TBD灏洋)； 中波紫外线荧光灯(北京中瑞达电光源厂提供)； 紫外辐照计(北京师范大学光电仪器厂) P多道肌电图仪(丹麦Dantel公司) Keypoint 台盼蓝(北京化工厂) RPMI-1640(GIBCO公司) 1．3方法： 右肋缘下剪去体毛，消毒后无菌摘取脾脏，放入预制冷的RPMI一1640液中。剪碎后经300 目尼龙网过滤，即制成单细胞悬液。离心洗涤后，用淋巴细胞分离液分离脾细胞，再用 ②脾细胞的照射：用中波紫外线荧光灯照射，以国产数字式UV光度计测量照射强度，强 度剂量为12000J／费，用0．2％台盼蓝染色计数细胞活率大于95％。 107个细胞的供体SD鼠 ③脾细胞的输注：以尾静脉方式给予Wistar受体鼠，总量2．5X 脾细胞。 ④神经移植过程： 新鲜同种异体神经移植组，不予任何预处理将SD大鼠的异体坐骨神经移植给Wistar大鼠。 III．组为预处理组，将经紫外线B照射后的SD大鼠的脾细胞经尾静脉途径给Wistar大鼠。 鼠毛，5％碘酒消毒、75％酒精脱碘后