class 11 第四章 神经生物物理学.pdf

第四章 神经与感观生物物理 第二节 膜离子通道 离子通道的研究方法 离子通道的类型 §4.2.1 研究离子通道的方法 • 分子生物学 –分子克隆- 一级结构 • 结构生物学 –二级结构预测 - 二级结构 –X-射线晶体学 - 三级及四级结构 –电子显微学 - 三级及四级结构 • 电生理学 –微电极细胞内记录技术- 功能：检测单个神经元基 本性质、研究电活动规律及其与兴奋和抑制等基本 功能活动内在联系 –膜片钳技术- 功能：启动深入研究神经元电活动离 子通道机制的探索过程，将电生理方法提高到记录 与研究单个蛋白质功能与活动的分子水平 膜片钳（patch clamp） 玻璃吸管进行热处理， 其直径仅几微米 • 将吸管吸附在细胞膜上，其中只 含一个离子通道 Note: • 微吸管与膜的封接非常紧密，电 1. The pipette is filled with a salt 阻高达10-100GΩ (1GΩ = 109 Ω) solution resembling that normally found in the extracellular fluid. • 高电阻保证来自于膜片的电流进 2. A metal electrode in contact with 入微电极和电子测量线路 the electrolyte in the micropipette connects the pipette to a special • 记录到的电流是单离子通道电流 electrical circuit that measures the current flowing through channels in the membrane under the pipette tip. 巨欧封接将管尖的小片膜与其余部分从电学上完全隔开。由 于紧密封接显著降低了记录中的背景噪声，提高了信噪比， 因而可记录到小片膜上仅几个pA的单个通道电流。然后将膜 电位钳制到不同水平，记录电流的变化，便可分析离子通道 的功能。 1991 Nobel Laureate: E NEHER B SAKMAN 膜片钳模式 细胞贴附式 内面向外式 单通道记录 外面向外式 全细胞式：记录细胞膜上所有通道 膜片钳的不同形式 乙酰胆碱（Ach ）受体门控的通道(背景：Ach从胞外与AchR结合) 膜片钳的优点 • 直接测量单通道电流，观察通道开关过程 • 可以对小细胞进行电压钳位 • 可以对膜片进行物理分离 – 在通道两侧改变溶液的成分和浓度，研究 各种药物对离子通道的影响 • 空间分辨率高，在中枢神经研究中分离胞体 与轴突和树突的离子电流 离子通道的记录模式