大豆皂苷的提取纯化和测定.docVIP

大豆皂苷的提取测定 1、大豆简介 1．1 大豆的组成成分：大豆主要成分为蛋白质35%、脂肪16%~21%、碳水化合物23%~ 27%、水分和粗纤维15%左右、皂苷和异黄酮等糖苷占2%左右, 其中, 皂苷约占0. 5%。 1．2 大豆皂苷的化学组成： 大豆皂苷，又称大豆皂甙（Soyasapon ins)属于三萜类齐墩果酸型皂苷, 是三萜类同系物的羟基和糖分子环状半缩醛羟基失水缩合而成, 它可以水解生成多种糖类和配糖体, 目前已确认的大豆皂苷约18种, 是由5种皂苷元( SoyasapogenoⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ )和糖基中的β-D-半乳糖、β-D-木糖、α-L-鼠李糖、α-L-阿拉伯糖、β-D-葡萄糖醛酸等6种单糖以及乙酰基大豆皂苷(A cety1- soyasaponin ) 所组成。大豆皂苷根据其苷元不同分为A 类、B 类、E 类和DDMP 类, A 类皂苷是以soyasapogeno lA 为配基的双糖皂苷, B 类和E类是以soyasapogeno lB和soyasa- po geno lE为配基的单糖皂苷, DDMP皂苷是以soyas- apogenoB 作配基在C-22 位上结合有2,3-dihydro- 2, 5- dinydroxy- 6-methy-l 4h-py ran-4- one的单糖链皂[ 4- 5 ] 。因为所有DDMP大豆皂苷对热不稳定, 受热易分解生成A 类和E 类皂苷, 所以, 有些人认为DDMP皂苷是大豆中存在的真正皂苷。 由低聚糖及齐墩果烯三萜缩合形成的一类化合物,具有抗癌、调节免疫功能、防治心血管疾病、抗菌、抗病毒、护肝等多重生理功效。除用作药物外, 皂苷还可以作为高级化妆品和食品添加剂, 如作为杀菌剂、抗氧化剂、发泡剂等, 在化妆品和食品工业中具有广泛的应用。 大豆加工制品种类繁多，一般分为传统的大豆制品和新兴大豆制品。传统豆制品分为非发酵制品如豆腐、干豆腐、豆腐皮、豆腐干、豆芽和发酵的豆制品如腐乳、豆豉、豆酱、酱油、天培、纳豆等；新兴的豆制品有大豆油脂、大豆蛋白、大豆磷脂、大豆低聚糖、大豆异黄酮、大豆纤维、大豆皂苷等。豆制品的生产过程中会产生大量的废水，这些废水含有大分子蛋白、小分子寡糖、有机酸、色素类物质和盐类等，极易腐败，BOD(生物需氧量)、COD(化学需氧量)值严重超标。另外还有很多有益的生理活性成分，如大豆异黄酮、皂苷、维生素、胰蛋白酶抑制剂等。在很多生产过程中这些废水往往直接由下水道排放，既污染了环境，又浪费了资源。因此，从豆制品生产的废水中提取功能性物质，无论对于环境保护还是对资源的充分利用都有着极其重要的现实意义。 豆腐的生产流程为： 大豆残渣则是用刚榨过豆浆的大豆湿豆渣在65℃条件下干燥至恒重, 过36目筛, 保存制作而成。 从上述生产流程可以看出，豆腐生产的废水主要来自于浸泡大豆的废水(泡豆水)和压榨豆腐产生的黄浆水，另外还有部分冲洗废水。具体成分见表1 本实验欲从大豆的废水、压榨豆腐产生的黄浆水和大豆残渣中测定大豆皂苷的含量，为从大豆生产废水中提取大豆皂苷做准备。 目前三萜皂苷的提取方法主要有冷浸法、回流提取法、树脂吸附法、凝胶吸附法、薄层层析法、超声提取法、酶提取法、微波提取法等. 通过对大孔树脂吸附法、有机溶剂提取法、微波提取法以及超声波提取法等四种常见提取方法进行比较,结果如下：
1、四种方法中除大孔树脂吸附法液料比为1：10外, 其余三种均为1：20。
2、四种大豆皂苷提取方法提取时所需温度分别为: 大孔树脂吸附法70℃ 、有机溶剂提取法80℃、微波提取法和超声波提取法均为60℃。
3、四种大豆皂苷提取方法提取时所需时间依次为: 大孔树脂吸附法最长, 为6h; 其次是有机溶剂提取法为3h; 再次为超声波提取法, 需25min; 微波提取法最短, 仅为90s。
4、四种大豆皂苷提取方法提取所得大豆皂苷吸光度依次为: 微波提取法( 0. 310) 超声波提取法( 0. 317) 大孔树脂吸附法( 0. 479) 有机溶剂提取法( 0. 489)。
5、四种大豆皂苷提取方法中大豆皂苷提取率依次为: 微波提取法( 59. 8%) 超声波提取法( 61. 0%)大孔树脂吸附法( 90. 2%) 有机溶剂提取法( 93. 4%)。 附：皂苷产率和提取率的计算式分别如下: 皂苷产率(%)= 皂苷实际产量/ 豆渣总质量×100= 提取液体积×提取液浓度/ 豆渣总质量×100 皂苷提取率= 皂苷产率/ 皂苷理论含量 通过上述四种提取方法的比较，结合实际生产条件，此次的大豆皂苷提取应采用有机溶剂沉淀法。大豆皂苷提取液中的主要杂质是可溶性糖和大豆异黄酮, 可溶性糖占到提取物干重的65%以上, 所以除糖是提高大豆皂苷纯度的关键。在大豆皂苷的纯化工艺中, 主