日本大肠菌群的检测方法(中文).docVIP

第4章　E.coli（大肠杆菌） E.coli 検査程序 使用培養基的制作程序 １）ＥＣ培養基（栄研器材，訂貨号：E-MB34） ①培養基計量　　：ＥＣ培養基37g加純水1000ml的比率混合加温溶解。 ②　分　　注　　：中試管内分別注入合適的量（約10ml）、放入達拉哈姆管、蓋上PP蓋。 ③　滅　　菌　　：高温滅菌器滅菌（121℃,15分）后、流水急速冷却。使用達拉哈姆管内無気泡的。 　 ※中試管和達拉哈姆管不需要滅菌、但要使用洗浄并干燥過的。 　※達拉哈姆管管必須開口向下放入試管。 　※培養基作成后、可以在常温下保存約2周。 　※毎個検体使用本培養基（10ml／1支試管）×6支試管＝60ml左右。 ２）EMB寒天培養基（栄研器材，訂貨号：Ｅ－ＭＡ13） ①　培養基計量　：EMB寒天培養基40g加純水1000ml的比率混合溶解。 ②　滅　　菌　　：高温滅菌器滅菌(121℃、15～20分)。 ③　分　　注　　：充分混合后、滅菌培養皿内分別注入約20ml、静置。 ④　干　　燥　　：使用之前在恒温箱内使培養基表面干燥。 予先多作成的場合、放于冷蔵庫保管、毎次使用要先使表面干燥。 ３）乳糖肉湯培養基（BTB加乳糖肉湯培養基、栄研器材，訂貨号：E-MB67） ①　培養基計量　：乳糖肉湯培養基18g加純水1000ml的比率混合加温溶解。 ②　分　　注　　：放入達拉哈姆管、中試管内分別注入合適的量（約10ml）。 ③　滅　　菌　　：高温滅菌器滅菌（121℃、15分）后、流水急速冷却。使用達拉哈姆管管内無気泡的。 E.coli 検査方法 ［EC培養基摂取］ 10倍希釈液制作 　：滅菌袋内加入試料25g和225ml滅菌希釈液、用均質器処理60秒后、攪拌混合。根据社内品質?衛生管理標準集Ⅰ的分類、按需要準備希釈的倍率。 明確標有「0/3 100倍」標準的場合、需準備10倍、100倍希釈液。 明確標有「0/3 10倍」標準的場合、需準備10倍希釈液。 試料接種　　　：希釈液各取1ml接種到EC試管里（毎1希釈倍率3支）。 培　　養　　　：44.5±0.2℃温度下培養24小時。 判　　定　　　：有気体産生時（3支中1支以上）判断其呈陽性。 　 ［EMB寒天培養基上画線塗抹］ 画線塗抹 ：EC培養基呈陽性的試管全部在1枚EMB寒天培養基上画線塗抹。 培　　養　　　　：35±1℃培養24小時。 判　　定　　　　 ：有金属光澤的集落（菌落）形成時、判断其呈陽性。 ［乳糖肉湯培養基(BTB加乳糖肉湯培養基)和革蘭氏染色試験］ 試料接種　　　　 ：用EMB寒天培養基得到的菌落接種乳糖肉湯培養基（毎一検体3支）和普通寒天斜面培養基。 培　　養　　　　 ：35±1℃培養24小時。 革蘭氏染色試験　　：培養后的菌落接種到革蘭氏染色用器具中、并用光学顕微鏡進行判定。 芽胞形成的確認　 ：培養后的菌落接種芽胞形成用培養基、培養2周后用光学顕微鏡判定有無芽胞形成。 判　　定　　　　 ：確認乳糖肉湯発酵管内有気体和酸産生(培養基黄変)、寒天斜面上的菌呈革蘭氏呈陰性、無芽胞杆菌時、可以最終判定其呈陽性。 〔判定照片一覧〕 第4章　E.coli（大腸菌） 30 食品25g + 磷酸缓冲液225ml 均質器処理 推定試験 摄取到EC培养基 44.5±0.2℃，24小時培養 判定：気体産生 ＥＭＢ寒天培養基画线涂抹 確認試験 35±１℃，24小時培養 判定：金属光泽菌落?? 乳糖肉湯培養基和革兰氏染色試験 35±１℃，24～48小時培養 完全試験 判定：乳糖肉湯培養基産生気体和酸 寒天培養基革兰氏陰性、无芽胞杆菌 A ○ ＥＣ培養基 E.coli 接種 気泡産生 B 革蘭氏染色 A：E.coli　　 B：Staphylococcus aureus(黄色葡萄球菌) 金属光澤菌落 ○ EMB寒天培養基 E.coli 接種 ○ EMB寒天培養基 Salmonella typhimurium 接種