化学核酸酶Cu(phen)2+的作用机制.pdf

化学核酸酶[Cu(phen) ]+ 2 • 核酸是生命体中的重要组成部分，核酸的断裂和 基因重组技术是分子生物学的核心技术，而对 DNA 的定位断裂是该技术的关键。 • 生物体内的限制性内切酶的识别位点仅为4～8个 核苷酸，并且剪切位点的数目有限。 化学核酸酶—— 化学合成的DNA 定位断裂工具 化学核酸酶 •是一类人工设计、合成的能够定位断裂DNA或RNA 的一 类新型非酶断裂工具，既有限制性内切酶的高度专一性， 又能在人们预先设计任何位点断裂DNA ，因此可用于基因 分离、DNA定位诱变、蛋白质和DNA 的印迹试剂、核酸 序列确定、复制起始位点的识别、肿瘤基因治疗和新的化 学治疗试剂等领域。 1. 杨频，高飞，马贵斌．化学核酸酶及其作用机理．化学进展，1997 （29 ）：273 2. Sigman D S，Mazumder A，Perrin D M ．Chemical Nucleases．Chem． Rev ．，1993 （93 ）：2295 3. 李元宗，常文保．生化分析．北京：高等教育出版社，2003 ：170 4. Chen C B，Milne L，Landgraf R et al ．Artificial Nucleases ． Chembiochem．，2001 （2 ）：735 20世纪70年代， D. S. Sigman等发现 • Cu–phen （邻菲罗啉）体系具有剪切DNA 的活性，其 中活性物种为[Cu(phen) + 2] ，这是第一个确定结构的 化学核酸酶。 Sigman D S. Chemical Nucleases. Biochem., 1990, 29:9097 1985， Healy P C等测定晶体结构： + [Cu(phen) ][CuBr ] 中[Cu(phen) ] 的结构 2 2 2 phen间二面角 [(phen) Cu]ClO 49.9 ° 2 4 [(phen) Cu][CuBr ] 76.8 ° 2 2 Healy P C, Engelhardt L M, Patrick V A et al. Lewis-base adducts of Group 1B metal(I) compounds. Part 19. Crystal structures of bis(1,10-phenanthroline)copper(I) perchlorate and dibromocuprate(I) . J. Chem. Soc., Dalton Trans., 1985:2541 1. [Cu(phen) ]+ 剪切DNA的机制 2 D. S. Sigman 的工作： • 1979，电泳实验，证明Cu2+与硫醇（MPA ）和phen 同时存在时能够有效地剪切聚核苷酸poly （dA– dT ）和SV–40 DNA 。 • 1981年，对比有氧和无氧条件下phen–Cu剪切DNA 的活性， 发现：无O ＋H O 2 2 2 剪切效率差不多 有O2 无H O 剪切效率显著下降 2 2