利用互补核酸杂交富集金胶实现信号扩增的电化学凝血酶蛋白生物传感器研究.pdfVIP

V01．28 高等学校化学学报 No．12 200 CHEMICALOFCHINESEUNIVERSmES 2274—2279 7年12月 JOURNAL 利用互补核酸杂交富集金胶实现信号扩增的 电化学凝血酶蛋白生物传感器研究 郑静1”，冯婉娟1，程圭芳1，黄翠华1，林莉1，何品刚1，方禹之1 (1．华东师范大学化学系，上海200062；2．上海工程技术大学化学化工学院，上海201620) 摘要介绍了一种利用互补核酸杂交富集金胶实现信号扩增的蛋白质生物传感器．以凝血酶蛋白为研究对 象，利用凝血酶蛋白相对应的两段核酸适配体，将适配体I固定在磁性颗粒上，用于特异性地捕获蛋白，将 适配体Ⅱ标记金胶作为检测信标．由凝血酶蛋白和相对应的两段核酸适配体构建三明治结构的凝血酶蛋白 生物传感器．另外，再通过信标金胶上过剩的核酸适配体链与另一段标记有金胶的互补核酸进一步杂交，获 得金胶的选择性聚集，实现了信号扩增．通过信号扩增，使此传感器的灵敏度大大提高，对凝血酶蛋白的检 物传感器对凝血酶蛋白有很好的特异性，其它蛋白如溶菌酶和牛血清白蛋白的存在对于检测没有影响． 关键词信号扩增；核酸适配体；凝血酶蛋白；金胶；电化学生物传感器 中图分类号0657．1；0646文献标识码A 人类基因序列的完成，宣告了后基因组时代的来临．蛋白质组学研究已成为2l世纪生命科学发展 的先导，通过对正常及病理个体之间的蛋白质比较和分析，从中辨认出某些疾病的特异性蛋白质，对 于疾病的早期诊断具有重要意义¨J．在许多疾病的诊断中，通常采用基于抗体抗原法的检测方法旧1． 但是，由于不是所有的蛋白质都能找到与之相对应的抗体或抗原，并且对蛋白进行标记又容易造成蛋 白的失活，所以发展高灵敏度、高选择性的蛋白质检测技术尤其重要． J．核 的DNA／RNA寡核苷酸，它能高效、特异性地结合各种配体如蛋白质、氨基酸及有机小分子等日q 酸适配体和抗体抗原相比，具有由人工合成、不依赖于动物或细胞、容易获得、稳定性和耐受变性好 等特点，可方便地在其特定位置用荧光、酶或生物素分子等功能团加以标记，并可长期贮存和在常温 下运输∞’7|．因此，利用核酸适配体的高度特异性发展新型蛋白质识别技术受到了极大关注哺’91． 在蛋白质和核酸分析方法中，电化学方法具有简单、快速、灵敏、成本低廉和易于实现微型化等 优点u¨121．纳米材料的应用为发展高灵敏、高选择性的电化学生物传感器带来了新的契机．金胶由 于其具有良好的生物相容性和很大的比表面积，而被广泛地用于DNA和蛋白质分子的检测¨n”J．而 磁性颗粒是一种新型的亲和性固相载体¨¨埔】，运用磁性颗粒固定生物分子，并结合分子识别技术，可 以实现对目标分子的分离、富集和特异性识别u9’20I． 凝血酶蛋白是一种重要的蛋白酶，在血液凝固、炎症和创伤等生理及病理过程中发挥着重要作 用．我们曾经报道了一种利用磁性颗粒和金胶构建三明治结构并用于选择性识别凝血酶的生物传感 器【l引．本文以此为基础，进一步介绍了通过金胶的选择性聚集实现信号扩增，建立超高灵敏度和高度 特异性的凝血酶蛋白生物传感器．其原理如图1所示．凝血酶蛋白有两个特异性的结合位点旧¨：一个 是血纤蛋白原；另一个是肝素．15个碱基的核酸适配体I选择性地结合肝素结合位点，而29个碱基的 核酸适配体Ⅱ则选择性地结合血纤蛋白原位点陋∞J． 收稿日期：2007-04．12． 基金项目：国家自然科学基金(批准号和上海市科委浦江人才计划(批准号：06PJl4032)资助 联系人简介：何品刚，男，教授，博士生导师，主要从事生物传感器、电化学及纳米材料等方面的研究． E-mail：pghe@them．eenu．edu．cn 郑静等：利用互补核酸杂交畜集金胶实现……电化学凝血酶蛋白生物传感器研究 2275 在实验中，将核酸适配体I固定在磁性颗粒上，用于蛋白的捕获，在核酸适配体Ⅱ上标记金胶。 在凝血酶蛋白存在下形成了核酸适配体I一磁性颗彬凝血矽核酸适