高效液相色谱法原理与应用(详细版).ppt

高效液相色谱法原理与应用 第1章 色谱基本原理 一、色谱法概述 色谱法的定义与特点 色谱法的分离原理 色谱法的特点 色谱法的分类 1.色谱法的定义 色谱分离效果图 因此 色谱法是一种分离方法。 它的特点是：有两相，一是固定相，一是流动相，两相作相向运动。 Chromatography 将色谱法用于分析中，则称为色谱分析。 色谱分析是一种分离、分析法。 2、色谱法分离原理 当流动相中所携带的混合物流过固定相时，就会和固定相发生作用(力的作用)。由于混合物中各组分在性质和结构上有差异，与固定相发生作用的大小也有差异。因此在同一推动力作用下，不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 3、色谱法的分类 按流动相状态的不同，可分为 什么是气相色谱法？ 以气体为流动相的色谱法 Gas Chromatogaphy，简称GC 适合分离分析易汽化（在- 190℃-500℃范围内有0.2-10mmHg的蒸气压的）稳定、不易分解、不易反应的样品，特别适合用于同系物、同分异构体的分离。 什么是液相色谱法？ 以液体为流动相的色谱法 Liquid Chromatogaphy，简称LC 适合分离分析高沸点、热不稳定、离子型的样品。 按固定相使用的形式可液相色谱法又可分为： 柱色谱（Column Chromatography） 将固定相装在色谱柱内 纸色谱（Paper Chromatography） 用滤纸做固定相或固定相载体的色谱 薄层色谱（Thin Lay Chromatography） 固定相均匀涂在玻璃板或塑料板上 拖尾峰 伸舌峰 鬼峰、假峰 畸峰 峰底 基线漂移 基线噪声 谱带扩张 死时间(tM):完全不保留组分流出系统的时间 保留时间(tR): 调整保留时间(t’R): 死体积(VM): 保留体积(VR): 调整保留体积(V’R): 容量因子（k）对分离度（R）的影响 梯度洗提 梯度洗脱即程序控制流动相的组成，使在整个分离过程中，溶剂强度按照特定的变化规律增加。 优点：分离复杂混合物，使所有组分都处在最佳的k值范围内。 缺点：检测器的使用受到限制，分析结果的重复性取决于流速的稳定性。柱子需进行再生处理。 装置 低压梯度（内梯度）：溶剂在常压下混合，再用高压泵输送至柱系统。简单、经济，只需一个泵，所用溶剂的元数没有限制。 高压梯度（外梯度）：一般由两台高压泵构成，每台泵输送一种溶剂。溶剂在混合室混合后，在输入柱系统。流量精密度高，溶剂的可压缩性和热力学体积的变化可能影响输入柱子中溶剂的组成。 实现方式 对于复杂样品，线性梯度是最好的。 正相色谱中，常用二氯甲烷加入正己烷来实现。 反相色谱中，乙腈，甲醇加入水中是最常用的。 三、色谱定性与定量方法 1. 色谱定性分析 (1) 纯物对照定性 各物质在一定的色谱条件下均有确定不变的保留值，因此保留值可作为定性指标。 实现方法 利用保留时间和保留体积定性 用相对保留值定性 用已知物增加峰高法定性 应用范围：适用于简单混合物，对该样品已有了解并具有纯物质的情况。 优点：应用简便，不需要其他仪器。 缺点：定性结果的可信度不高。 提高可信度的方法：双柱、双体系定性 (2) 与其它仪器或化学方法联合定性 离线联用方式 化学法 仪器法 在线联用方式 化学法 仪器法 离线联用方式 收集方法：馏分收集器 应用范围：无标准物时，可对较为复杂的混合物进行定性分析 缺点：麻烦 在线联用方式 与其它仪器联用定性 混合物经色谱分离后，将各组分直接由接口导入其它仪器中进行定性。常用的联用方法有：LC-FTIR、LC-MS…… 其它仪器相当于色谱仪的检测器。 使用范围：复杂样品的定性。 优点：不需要标准物，定性结果可信度高，操作方便。 缺点：需要特殊仪器或设备。 2 色谱定量分析 (1) 色谱定量基础 色谱定量分析是基于被测物质的量与峰面积成正比。在一定色谱条件下有： （2）定量要解决的问题 峰面积的测量和计算 校正因子的测量与计算 色谱定量方法及其应用 峰面积的测量与计算 积分仪或色谱工作站 简便、速度快，精度高，可达0.2-2%，对小峰及不对称峰的结果准确，是色谱发展趋势。 手动测量与计算 峰高乘半峰宽法：适于对称峰 峰高乘峰底宽度法：适于矮宽峰 峰高乘平均峰宽法：适于不对称峰 峰高乘保留值法：适于狭窄峰，快速简便，常用于工厂控制分析。 重叠峰的测量 切线分峰 垂线分峰 连线分峰 计算机拟合分峰 校正因子的测量与计算 相对校正因子 由于绝对校正因子与仪器的灵敏度有关，又由于灵敏度与实验条件相关