十色谱分析法概论.ppt

第十六章色 谱 分 析 法 概 论 概述色谱法是一种重要的分离、分析技术。一、色谱法（起源） 第一节 色谱法的分类和发展 第二节 色谱过程和基本原理 三、分配系数与色谱分离 第三节 基本类型色谱方法及其分离机制 第四节 色谱法基本原理 塔板理论的基本假设为： 1）色谱柱内存在许多塔板，组分在塔板间隔（即塔板高 度）内完全服从分配定律，并很快达到分配平衡。 2）样品加在第0号塔板上，样品沿色谱柱轴方向的扩散可 以忽略。 3） 流动相在色谱柱内间歇式流动，每次进入一个塔板体积 4） 在所有塔板上分配系数相等，与组分的量无关。 ??? 二、速率理论 1956年荷兰学者Van Deemter等人吸收了 塔板理论的概念，并把影响塔板高度的动力 学因素结合起来，提出了色谱过程的动力学 理论--速率理论。 它把色谱过程看作一个动态非平衡过程， 研究过程中的动力学因素对峰展宽（即柱 效）的影响。 速率理论的简化方程式: H=A+B/u+Cu ㈠影响塔板高度(柱效)的动力学因素 ⒈涡流扩散： A=2λdp 由于色谱柱内填充剂的几何结构不同，分子在 色谱柱中 的流速不同而引起的峰展宽。 dp为填料直径，λ为填充不规则因子，填充越不均匀λ 越大。 HPLC常用填料粒度一般为3~10μm，最好3~5μm，粒 度分布RSD≤5%。但粒度太小难于填充均匀（λ大），且 会使柱压过高。大而均匀（球形或近球形）的颗粒容易填充 规则均匀，λ越小。 总的说来，应采用细而均匀的载体，这样有助于提高柱 效。毛细管无填料，A＝0。 一、塔板理论（半经验理论）（P351） 该理论是1952年马丁 （Martin）等人提出 从热力学角度讨论了流出 曲线形状与分离效果关系。 塔板理论将色谱柱假想为一个精馏塔。 即色谱柱（柱长L）是由一系列连续的、相等 的水平塔板组成，每一块塔板高度为H，在每 一块塔板上，溶质在两相间很快达到分配平 衡，然后随流动相按一个一个塔板的方向向 前移动。 虽然以上假设与实际色谱过程不符，如 色谱过程是一个动态过程，很难达到分配平衡； 组分沿色谱柱轴方向的扩散是不可避免的。但是 塔板理论导出了色谱流出曲线方程，成功地解释 了流出曲线的形状、浓度极大点的位置，能够评 价色谱柱柱效。 n与色谱参数之间的关系（经验公式）为： 由此可以看出，组分保留时间越长、峰宽度 越小，则n越多，色谱柱效能越高。 塔板理论贡献： ①分配系数不同，最终可分离。 ②平衡次数n （50），曲线接近正态分布 曲线。 ③给出了n与Wb的关系式（由此关系式可得 出流出曲线与分离效果关系）n ，柱效 。 若两组分K相同，则无论n多大，都无法分离。 塔板理论不足： ①无法解释峰扩展原因。 （为使n↑，则Wb应↓ ，如何使Wb ↓ ？） ②无法解释影响塔板高度的因素 （L一定，n∝1/H,如何使H ↓？） * * 1906年，俄国植物学家茨维特（Tswett）首次研究了植物叶的色素成分。（如图） 分析过程为离线的，即不能连续进行。 人们将这种方法称为色谱法，随着色谱法的发展，可对大量无色物质进行分离，但仍沿用了色谱法这一名词。 现代色谱法 的分离、分析 过 程是在线 的，即连续进 行。 二、色谱法特点 ①分离效率高 ②选择性好 ③集分离、分析于一体 ④灵敏度高（可测10-11—10-13g） ⑤分析速度快 ⑥易与其它仪器联用，应用范围广 一、色谱法的分类 1.按两相（固定相与流动相）状态分类 气相色谱法 色谱法 液相色谱法 超临界色谱法 2.按分离原理分类 吸附色谱 分配色谱 色谱法 离子交换色谱 凝胶色谱（扩散）、 亲和色谱、络合色谱、热色谱等 3.按固定相形式分类 填充柱色谱 柱色谱 色谱法 毛细管色谱 纸层色谱 薄层色谱 二、色谱法的发展 ㈠色谱法的历史 ㈡色谱法的现状和发展趋势 1.新型固定相和检测器的研制 2.色谱新方法的研究 3.色谱联用技术 4.色谱专家系统 一、色谱过程及色谱图 二、色谱流出曲线和有关概念 ㈠色谱流出曲线 1.色谱流出曲线 当试样流经色谱柱后，各组分随流动相的移动