短小芽孢杆菌漆酶.docVIP

现代工业发酵调控学 结 课 论 文 中文题目: 短小芽孢杆菌漆酶：一个有很 大底物范围的耐热酶 英文题目: Bacillus pumilus laccase: a heat stable enzymewith a wide substrate spectrum 学生姓名 林胜兰 系 别 农学系 专业班级 2009 级 生物技术 专业 1班 指导教师 黄亮 成绩评定 2011 年11月 目 录 摘要……………………………………………………………………………1 材料与方法……………………………………………………………………5 实验材料………………………………………………………………………5 短小芽孢杆菌漆酶的复制……………………………………………………6 底物/介质筛选和靛卡红脱色 ………………………………………………7 短小芽孢杆菌漆酶CotA的生物化学性质 ………………………………9 讨论……………………………………………………………………………14 结论……………………………………………………………………………16 参考文献………………………………………………………………………17 致谢……………………………………………………………………………22  摘 要 背景：漆酶是多铜氧化酶类，它能催化一系列明显复合物的电氧化。漆酶底物包括取代苯酚、芳基胺和芳基硫醇。复合物被激进分子的酶激活。由于它们的明显底物范围的漆酶是要成为多功能生物催化剂，所以多功能生物催化剂有氧化自然和非自然工业复合物的能力，水是唯一副产物。 结果：一个来自短小芽孢杆菌的新奇cotA类型漆酶被克隆、表达和纯化。它的生物化学特点是存在在这儿的。净化漆酶分子的分子重量估计是58千道尔顿（kDa）,这个酶被发现与四个铜原子相联系。之前，它对2,2’—连氮—双—（3—乙基苯并噻唑啉磺酸（ABTS）(是德国Boehringer Mannheim公司商标)，2,6—二甲基(2,6—DMP)和丁香醛连氮（SGZ）的催化活力被调查研究。对于ABTS，动力参数Km和Kcat是80±4μm和291±2.7/s,对于2,6—二甲基(2,6—DMP)是680±27μm和11±0.1/s,对于丁香醛连氮（SGZ）仅仅Kcat就可能被估计是66±1.5/s。对于ABTS，最适pH是4，对2,6—二甲基(2,6—DMP)最适pH值是7，对丁香醛连氮最适pH值为6.5。发现对ABTS和2,6—DMP的最佳温度在70℃左右。37个自然和非自然复合物作为短小芽孢杆菌漆酶的底物揭露了18个稳定复合物。其中三个在靛蓝染色漆酶催化脱色中充当氧化还原介体，因此来估算新的酶类生物技术的潜力。 总结：来自短小芽孢杆菌的全铜、耐热的cotA漆酶是一个多功能的漆酶，并有着工业生物催化的应用前景。 关键词：短小芽孢杆菌 漆酶 生物催化  ABSTRACT Abstract Background: Laccases are multi-copper oxidases that catalyze the one electron oxidation of a broad range of compounds. Laccase substrates include substituted phenols, arylamines and aromatic thiols. Such compounds are activated by the enzyme to the corresponding radicals. Owing to their broad substrate range laccases are considered to be versatile biocatalysts which are capable of oxidizing natural and non-natural industrialcompounds, with water as sole by-product.