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生化分析（Biochemical Analysis） 生命科学与生物工程 罗云敬 生化分析 酶分析法 蛋白质分析 免疫分析 核酸分析 氨基酸分析 糖的分析 生物大分子分离纯化技术 课程主要内容： 第一章 酶催化反应，酶法分析的检测技术。 第二章 蛋白质的分类及结构，蛋白质分析方法。 第三章 免疫分析方法的建立、优化及其应用。 第四章 核酸的定量及结构分析, DNA序列测定, 核酸分子杂交分析。 第五章 氨基酸的定量和选择性分析。 第六章 糖的化学和酶法分析, 糖混合物的分离鉴定。 第七章 分光光度和荧光光谱的原理，谱图分析，实验设计技巧。 第八章 液相色谱原理及色谱仪的基本装置，关键技术。 第九章 主要电泳与离心方法, 操作要领。 第八章 酶法分析 酶及酶催化反应 酶法分析的检测技术 酶固定化技术与酶传感器 酶活性测定的应用 什么是酶？ 酶是生活细胞产生的，具有催化作用的蛋白质。 酶是生物体内具有催化活性的，有特殊空间构像的生物大分子，包括蛋白质和核酸。 酶是生活细胞产生的以蛋白质为主要成分的生物催化剂。 酶的特性 来源于生物体 催化效率高（是化学催化剂的107_1013倍） 高度的特异性（底物专一性） 易失活（高温、强酸、强碱、重金属盐及紫外线） 1、高效性 酶的催化作用可使反应速度提高10７ –101３倍。 　例如：过氧化氢分解 2H2O2 ? 2H2O + O2 用Fe3+催化，效率为6×10-4 mol/mol·S，而用过氧化氢酶催化，效率为6×106 mol/mol·S。 转换数（turnover number）的概念：每秒钟每个酶分子能催化底物发生变化的微摩尔数，用kcat表示（ ?mol/S ）。 ?-淀粉酶催化淀粉水解，1克结晶酶在65?C条件下可催化2吨淀粉水解。 2、 酶的专一性 酶的专一性：又称为特异性，是指酶在催化生化反应时对底物的选择性，即一种酶只能作用于某一类或某一种特定的物质。亦即酶只能催化某一类或某一种化学反应。 例如：蛋白酶催化蛋白质的水解；淀粉酶催化淀粉的水解；核酸酶催化核酸的水解。 3、反应条件温和 酶促反应一般在pH 5-8 水溶液中进行，反应温度范围为20-40?C 。 高温或其它苛刻的物理或化学条件，将引起酶的失活。 4、酶易失活 凡能使蛋白质变性的因素如强酸、强碱高温等条件都能使酶破坏而完全失去活性。所以酶作用一般都要求比较温和的条件如常温、常压和接近中性的酸碱度。 5、酶活力可调节控制 　　　如抑制剂调节、共价修饰调节、反馈调节、酶原激活及激素控制等。 ６、某些酶催化活力与辅酶、辅基及金属离子有关。 1.1 酶及酶催化反应 1.1.1 酶的单位 酶活力（Enzyme Activity）：在一定条件下，单位时间内底物的减少量或产物的增加量。 酶的国际单位（International Unit，IU）：在特定条件下1min将1umol的底物转化为产物所需酶的量。 卡特尔（Katal）：1Katal为1s内将1mol底物转化为产物所需酶的量。（1katal=6×107UI） 酶的比活力（Specific Activity）：每毫克每蛋白所具有的催化活性，即IU/mg 1.1.2 酶催化反应的类型及酶的编号 1. 氧化还原酶类 Oxidoreductases 2. 转移酶类 Transgerases 3. 水解酶类 Hydrolases 4. 裂合酶类 Lyases 5. 异构酶类 Isomerases 6. 连接酶类 Ligases 酶的编号 例：醇脱氢酶（EC 1.1.1.1) EC：Enzyme Commission（酶学委员会） 1：氧化还原酶类 1：以 CH—OH基为供体的酶类 1：代表NAD或NADP为受体 1：同一类酶的顺序编号，与发现的先后一 致 1.1.3酶催化反应的特性 酶反应与非酶反应活化能的比较： 酶对反应的加速是通过形 成酶与底物的复合物以降低反应的活化能△G而实现的 1.1.3酶催化反应的特性 酶活性中心的化学结构，诱导使底物的化学键变形或极化——提高底物基态的能量。 底物与酶的结合部位对底物的固定化作用，使底物分子进入酶的活性中心，使得很多反应类似于分子内反应（接近效应）——提高了活性中心的底物有效浓度。 1.1.3酶催化反应的特性 底物正确而有利的定向，底物反应时键只最小程度的移动或旋转，电荷分布和有利的几何形状——降低反应所需活化能。 多功能基团间的协同催化作用 酶活性中心的特点 概念： 酶结合底物（辅基）以及提供直接参与键形成和断裂的残基的区域。 特点： （1）活性部位只占酶整体的一小部分