农药合成与分析.ppt

高效毛细管电泳及其在农药分析中的应用 一、问题的提出 我国现有中药种类已达12807种，其中药用植物11146种，药用动物1581种，药用矿物80种．中草药在保护人民群众健康方面起着重要作用．由于需求量大，野生中草药远远不能满足市场的需求，目前大部分中草药都依赖人工栽培．全国药材种植面积超过580万亩，药材生产基地600多个，常年栽培的药材达200余种．为了保障种植药材的产量，药农不得不频繁地使用各种农药．农药残留不仅影响群众的健康，还影响我国名贵药材的出口创汇．如80年代末云南省出口日本的三七大量退货，目前我国人参在海外市场日益受韩国高丽参的排挤等，都有农药残留超标的原因． 二、CE的特点 高质量灵敏度：常用紫外检测器的检测限可达10-13－10-15mol，激光诱导荧光检测器(LIF)则达10-19-10-21。。 高分辨率：每米理论塔板数为几十万，高者可达几百万乃至几千万。 高速度：许多分析可在10分钟内完成，有的可在60秒内完成。 所需样品少：只需纳升(10-9升)的进样量。 成本低：只需少量(几毫升)的流动相和低廉的毛细管。 应用范围广：除分离生物大分子（肽、蛋白、DNA和糖等）外，还可用于小分子(氨基酸、药物等)及离子(无机及有机离子等)，甚至可分离各种颗粒(如硅胶颗粒等)。 不足之处： 进样不够方便。应用范围相对较窄。 分析阴离子时，由阴极进样，在阳极检测。但电渗流方向与阴离子受电场力作用移动方向相反，出峰时间较长。 高效毛细管电泳仪器（1） 高效毛细管电泳仪器（2） + 原理 以高压电场为驱动力,以毛细管为支撑物,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术. 电泳: 电渗:在高电压作用下,双电层中的外层阳离子引起流体整体向负极方向移动的现象. 3.电泳现象与电渗流现象 待测化合物粒子在毛细管内电解质中的迁移速度(离子淌度或表观淌度)等于自身电泳和电渗两种速度的矢量和. 正离子的电泳和电渗流方向一致,最先流出;中性粒子的电泳流速为0,所以其迁移速度等于电渗速度;负离子的电泳方向和电渗流方向相反,它将在中性粒子之后流出,从而因各种栗子的迁移速度的不同而实现分离. 4. 分离过程 四、CE的分离模式 1 毛细管区带电泳(capilary zone electrophoresis,CZE) CZE的分离机理是基于各被分离物质的净电荷与质量比(荷质比)间的差异。应用范围包括氨基酸、肽、蛋白、离子分析、对映体拆分和很多其它离子态物质的分析。 2 胶束电动色谱(micellar electrokinetic capillary chromatography，MECC) MECC是唯一既能分离中性溶质又能分离带电组分的CE模式。采用表面活性剂(如十二烷基硫酸钠，SDS)在操作缓冲液内形成有一疏水内核、外部带负电的胶束相。利用溶质具有不同的疏水性，在水相和胶束相(准固定相)间分配的差异得以分离。主要用于小分子、中性化合物，手性对映体、各种药物等。 (3) 毛细管胶束电动色谱（MECC） 3毛细管凝胶电泳(capillary gel electrophoresis，CGE) CGE是将凝胶移到毛细管中作支持物进行的电泳。不同体积的溶质分子在起“分子筛”作用的凝胶中电泳分离。常用于蛋白质、寡聚核苷酸、RNA、DNA片断分离和测序及PCR产物分析。现在还有采用无胶筛分方法，同样可达分离目的。 4毛细管等电聚焦(capillary isoelectric focusing，CIEF) CIEF是用两性电解质在毛细管内建立pH梯度，使各种具有不同等电点的蛋白质在电场作用下迁移到等电点的位置，形成一非常窄的聚焦区带。已成功用于测定蛋白质等电点，分离异构体或用其它方法难于分离的蛋白质。 5毛细管等速电泳(capillary isotachophoresis ，CITP) CITP采用先导电解质和尾随电解质，使溶质按其电泳淌度不同得以分离，是一种较老的方式。现在可作为柱前浓缩方法用于富集样品。 6毛细管电色谱(capillary electrochromatography，CEC) CEC是将HPLC中众多的固定相微粒填充到毛细管中，以样品与固定相之间的相互作用为分离机制，以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。虽然柱效有所下降，但增加了选择性，是一种有发展前景的模式。 三、影响柱效的因素及改进方法 五、 在农药分析中的应用 1. 定量分析研究 2. 在农药制剂和原药中有效成分的测定 3. 在农药中杂质的分离和测定 4. 手性农药分析 六、应用实例－ 毛细管电泳法研究提取剂对黄连－黄柏共煎剂中生