教学大纲-综合实验技能训练供参习.doc

《综合实验技能训练Ⅱ》教学大纲 （Comprehensive Experimental Skills Training Ⅱ） 课程代码： 学分：3 总学时数：54 先修课程： 细胞工程 开课对象：2011级生物技术专业学生 一、目的要求 通过课程学习，使学生逐步掌握细胞工程技术实验的基本方法、基本技术、实验设计原则以便获取细胞工程技术知识；提高对实验中各种实验现象的观察、分析、思考和解决问题的能力；培养科学的思维方法、实事求是的科学态度和严谨的学风；提高分析、归纳问题和文字表达能力。熟悉和掌握细胞培养中所用到的器皿和器械的清洗和消毒技术；掌握针对具体目的和器具有不同的清洗和消毒策略。对细胞培养中所用到的器皿和器械进行清洗和消毒。 浸泡 初次使用和培养后的玻璃器皿都需用水浸泡。新用的玻璃器皿，常带有许多干涸在上面的灰尘，同时又由于生产的原因，常呈碱性并带有一些对细胞有毒性的物质，如铅和砷等。在使用前要经稀盐酸（5%）浸泡，中和其中的碱性物质便于清洗。用过的玻璃器皿往往带有大量蛋白质附着，干涸后不易刷洗掉，故用后要立即用清水浸泡。 刷洗 浸泡后的玻璃器皿一般仍然要用毛刷沾洗涤剂洗去玻璃器皿上的杂质。刷洗次数太多，会损害器皿的表面光洁度，洗涤剂有使pH上升的趋势，所以宜选用软毛刷和优质的洗涤剂。禁用去污粉，因其含有沙粒，会严重破坏玻璃器皿的光洁。 酸洗 刷洗不掉的极微量杂质经过洗液的强氧化作用可被除掉。洗液对玻璃器皿无腐蚀作用，去污十分有效，是清洗过程中最关键的一环。洗液是由重铬酸钾、浓硫酸和水按一定比例配制而成，浸泡时，器皿要充满洗液。常用的洗液配方见附表一。 冲洗 刷洗和洗液浸泡后都必须用水充分冲洗，不留任何残迹，然后用蒸馏水漂洗2~3次，凉干备用。 （2） 塑料器皿 塑料器皿耐腐蚀能力强，但质地较软，且不耐热，因此它和玻璃器皿清洗不同。通常的方法是：先用清水充分浸泡和冲洗；再用2%NaOH溶液浸泡过夜，自来水冲洗，然后用5%稀盐酸浸泡30分钟，再用自来水冲洗，最后用蒸馏水漂洗3次，晾干备用。 （3） 滤器 玻璃滤器与玻璃器皿清洗相同。无论是浸泡还是酸浸，都可用抽滤法。 使用后，立即将清水注入滤器，抽气过滤，反复抽滤5次。 干净铬硫酸洗液或热浓硫酸注入滤器，抽气过滤至酸液滤过完毕。 用清水再次抽滤10次。 蒸馏水抽气过滤3次。 蔡氏滤器使用后弃去石棉滤膜，金属部分刷洗干净，最后用蒸馏水漂洗2~3次，晾干备用。 （4）橡胶塞 新购置的胶塞带有大量滑石粉，先用自来水冲洗干净，常规处理，每次用后的胶塞用水浸泡，然后用2%NaOH煮沸15min左右，自来水冲洗，再用1%稀盐酸浸泡30min，最后用自来水冲洗和蒸馏水漂洗，晾干后备用。 4．实验类型：操作 5．主要仪器： 超净工作台，干燥箱，镊子，剪刀，解剖刀,酒精灯，75%酒精， 三角瓶，无菌培养皿等。? 实验七 植物快速繁殖体系建立 1．实验类别：专业 2．实验目的： 掌握利用叶片作为外植体进行无性繁殖的方法。 3．实验主要内容： 1）、培养基的配制 ①愈伤组织诱导培养基：MS + 2,4-D1.0 mg/L(单位下同)+ NAA 2.0+KT0.5。 ②愈伤组织分化培养基： MS +KT2.0+IAA0.5。 ③幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 + NAA 0.2。 ④生根培养基：MS + NAA 0.2。 上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8。 2）、接种 取烟草幼嫩叶片用自来水充分洗净后，经75%酒精消毒30s, 0.1%升汞溶液浸泡8min，无菌水冲洗5-6次后，去掉主叶脉和大的侧叶脉，将叶片切成1.0-1.5cm2的小方块，接入①中培养，接种时下表皮与培养基接触。培养温度25士2℃，光照14 h/d，光照强度2000 lx。每三角瓶接种3-5个外植体。 3）、愈伤诱导 约2-3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织。 4）、愈伤组织的分化 将愈伤组织转接到分化培养基②上，15d后，从疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。40d后，从愈伤组织上分化出越来越多幼芽。 5）、幼芽的增殖 将幼芽切下，转接至不加2,4-D的幼芽增殖培养基③上，可不断增殖，发育成绿色健壮的小苗。 6）、诱导生根及移栽 取约3-4cm长的无根小苗接种于生根培养基④中，约7-8d后，外植 体从其基部产生白色幼根，当试管苗长至5-6cm高时，打开瓶口，在散射光下放置2d后取出，洗去根部残留培养基，种植于经过消毒的珍珠岩、泥炭土和菜园土等量混合的基质中，成活率可达95%以上。 4．实验类型：