细菌的及诊断与防治.pptVIP

安徽医科大学微生物学教研室 不同疾病、不同时期取不同部位标本 如流脑病人取CSF、血液或出血瘀斑；伤寒病人在病程1～2周内取血液，2～3周时取粪便。 尽可能取病变明显部位的材料 取局部病变标本，不可使用消毒剂，必要时以无菌生理盐水冲洗，拭干后取材。 生物安全 采取烈性传染病或感染原因不明患者的临床标本，务必注意安全性。 例如：接触患者血液、体液和破损皮肤时应戴上手套。 原则上所有标本均应作分离培养获得纯培养后进一步鉴定，根据不同要求选用不同培养基。 分离培养比直接涂片镜检阳性率高，但需时较久；大多细菌16～20h，结核分枝杆菌需4～8w。 分离培养是微生物学诊断的金标准。 主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等。 常用动物：小鼠、豚鼠、家兔等。 接种途径：皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内等。 　测定标本中致病菌对药物的敏感程度；对指导临床用药及控制感染有重要意义。 　常用：纸碟法和试管稀释法。 种 类: 第三节 分子生物学诊断 PCR： 　　　RT-PCR 、实时荧光定量PCR DNA探针技术： 　　　原位杂交、 Southern /Nouthern印迹法 DNA芯片技术 致 病 菌 检 验 程 序 第四节　细菌感染的特异性防治 自然免疫　Natural Immunization 自然主动免疫：隐性或显性感染 自然被动免疫：通过胎盘或初乳获得母体抗体 人工免疫 Artificial Immunization 人工主动免疫：接种疫苗或类毒素等 人工被动免疫：注射抗毒素或丙种球蛋白等 　　　选用免疫原性强的细菌经人工大量培养后，用理化方法杀死而成；如伤寒、百日咳、霍乱等灭活疫苗。 优点：易于制备和保存。 缺点：接种剂量大；维持时间短；接种次数多；注射的局部和全身性副反应较大；不产生细胞或黏膜免疫应答。 　 由微生物主要保护性抗原制成不含核酸，可以诱发机体产生抗体的疫苗称为亚单位疫苗。 如 ：脑膜炎球菌的荚膜多糖，乙肝疫苗等。 　　　外毒素经0.3～0.4%甲醛作用3～4周后，毒性消失仍保持免疫原性的制品。 如：白百破三联疫苗（DPT）是将白喉类毒素、百日咳死菌苗、破伤风类毒素混合而成。 人工被动免疫常用试剂有： 1、抗毒素： 用细菌类毒素或外毒素多次免疫马匹，分离血清提取其免疫球蛋白精制成抗毒素制剂；能中和外毒素。 如：白喉抗毒素、TAT；使用此制剂前必须作皮试。 ２、胎盘球蛋白/丙种球蛋白 * * 细菌感染的诊断 方法与防治原则 第七章 一、临床标本的采集原则： 无菌采集 严格无菌操作，避免标本被污染。标本分离病原菌时，应注意某些特定部位的正常菌群。 第一节 细 菌 学 诊 断 早 期 采 集 采集时间最好是病程早期、急性期或症状典型时，且必须在抗菌药物使用前，否则这份标本在分离培养时要加入药物拮抗剂。 尽快送检、冷藏运送 一般标本采集后最好在2h内送检，大多细菌可4℃冷藏运送、特殊（如：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌）需保温立即送检。 粪便标本中杂菌多，常置于甘油缓冲盐水保存液中。 （一）直接涂片染色镜检 形态和染色性上有特征的致病菌，直接涂片镜检后有助于初步诊断。如：痰中查抗酸性杆菌，脓液中找G+葡萄串状球菌，粪便中查霍乱弧菌等。 二、细菌学诊断方法 （二）分 离 培 养： 各种细菌所具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力亦不一致，因而其代谢产物有别，藉此可对不同致病菌进行鉴别（如肠道杆菌）。 （三）生 化 试 验： 含特异抗体的免疫血清＋未知纯种细菌进行血清学检查，可确定致病菌的种和型。 凝集试验：玻片凝集试验 免疫标记技术：ELISA （四）血清学试验： 动 物 试 验： 药物敏感试验： 金黄色葡萄球菌的纸片药敏试验: 金黄色葡萄球菌对青霉素、先锋霉素和红霉素很敏感，但对庆大霉素敏感性稍差些。 大肠埃希菌的纸片药敏试验: 大肠埃希菌对先锋霉素和庆大霉素敏感，但对青霉素和红霉素则无抑制作用。 原理: 用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。 标本: 诊断最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高≥4倍方有意义。 第二节 血