光敏色素蛋白的克隆表达和藻红蓝蛋白α亚基的特性分析.pdfVIP

摘 要 光敏色素（phytochrome ）由蛋白质和发色团组成，是一种典型的具有在红 光-远红外光区域（R/FR ）可逆光致变色效应的光感受器，普遍存在于高等植物、 细菌以及蓝藻中。集胞藻 PCC6803 中就具有类似高等植物光敏色素的细菌光敏 色素。通过对集胞藻 PCC6803 基因编码蛋白的蛋白质结构预测分析后，成功克 隆了slr1212 和 slr2031 两基因片段，并获得了相应的蛋白，后期工作将该蛋白与 藻胆色素共价耦合，运用各类光谱技术分析，研究光敏色素捕获光能感受光能的 特性。 藻胆蛋白是一类捕光色素蛋白，藻红蓝蛋白 （phycoerythrocyanin ，简称 PEC ） 是藻胆蛋白的一种。本文进行了重组藻红蓝蛋白的生物合成条件、色素蛋白稳定 性的影响因素和色素肽的稳定性研究。这些研究可作为藻胆蛋白在应用研究的重 要补充，具有实际的经济意义。 通过分子生物学的方法，将重组藻红蓝蛋白亚基相关的基因转入大肠杆菌 中，共表达实现了藻红蓝蛋白亚基的生物合成。其中重组蛋白在温度为 28 ℃， 诱导表达时间为 14h，诱导剂 IPTG 量为 1.0mmol/L 的条件下，表达蛋白含量最 高为 11.271mg/100mL。 研究了温度、pH 、光照、离子强度、金属离子和小分子等因素对重组藻红 蓝蛋白亚基稳定性的影响。结果表明，重组蛋白在避光条件下，温度低于 37℃， pH 为 4~9 能很好保存，紫外照射和多数金属离子对重组蛋白荧光有很强的猝灭 作用，在低浓度中性盐和低浓度碳水化合物溶液中，重组蛋白有较好的稳定性。 研究了影响重组藻红蓝蛋白 α亚基色素肽稳定性因素。实验证明，磷酸缓冲 液对色素肽的改变不大，多烷醇类溶剂对色素的性质影响较大，色素肽在甲醇保 存时间最长。 关键词：光敏色素 藻红蓝蛋白 重组 稳定性 I Abstract Phytochrome combined with protein and chromophore was a kind of typical photo chromic photoreceptors in the far-infrared light region (R / FR). It was widespread in the plant, bacteria and cyanobacteria. Cyanobacteria phytochrome was existed in the Synechocystis sp.PCC6803. Through the protein structure prediction analysis finished in the Synechocystis sp.PCC6803 gene, we succeed to get slr1212 and slr2031 gene and their protein. We hoped the protein connected with chromophore and studied the mechanism by spectroscopy analysis. Phycobiliprotein included phycoerythrocyanin(PEC) was a class of light-harvesting pigment-protein. We studied the reorganized -PEC in the biosynthesis conditions, factors influencing the stability and stability of pi