第四讲蛋白质结构解析技术(一).pptVIP

第一节 蛋白质氨基酸序列分析技术 主要内容 化学法 基因方法 蛋白质分子中二硫键和酰胺基位置的确定 蛋白质测定新技术 一、蛋白质测序的研究历史 N-末端氨基酸的测定方法（主要5类） 1、二硝基氟苯法（DNFB法、Sanger法） 2、二甲氨基萘磺酰氯法（DNS-Cl法） DNS-氨基酸呈荧光 3、异硫氰酸苯酯法（PITC法） 4、DABITC法（甲氨偶氮苯基异硫氰酸苯酯 ）， 形成的DABIH—氨基酸呈桔黄色（有颜色） 5、氨肽酶法 N-末端测定的方法——奠定了序列测定方法发展基础 二、序列测定方法——化学方法 （一）N端测序法 应用最广的N端顺序测定法大多仍以Edman降解原理为基础设计。 利用化学试剂和控制反应条件，从N端开始，将肽链逐步降解，进行氨基酸序列的测定的方法。 1、Edman降解法——异硫氰酸苯酯（PITC）法 特点： 可以测定氨基酸的排列顺序（包括N端分析）。 适用于手工操作，也可设计自动化测定仪器 （1）原理： 四点： ① 异硫氰酸苯酯(PITC)偶联 →② ATZ -氨基酸裂解→ ③ PTH-氨基酸转化→④ PTH-氨基酸的鉴定 高效液相色谱（ HPLC） （high performance liquid chromatography） （2） 氨基酸序列分析仪器 以Edman法测序，手工操作繁琐，工作量大 根据Edman降解的原理——