内切纤维素酶突变库的构建与初步筛选.pdfVIP

摘 要 内切纤维素酶突变库的构建与初步筛选 面对日益突出的能源短缺问题，寻找新的可再生能源成为当今世界一大主 题。纤维素是地球上数量最多的碳水化合物多聚物,它是再生能源和再生材料的 主要来源。因此，能够水解纤维素的纤维素酶受到越来越多的关注。研究的主要 热点是寻找一种活力高且稳定的纤维素酶。目前用于纤维素酶筛选的底物大多是 可溶性底物，其与纤维素酶的不可溶的天然底物结构不同，因而在实验室中筛选 出的高活力纤维素酶，对于天然底物的水解能力并没有得到相应的提高。不可溶 底物不能穿过细胞膜进入细胞内，无法与表达在细胞内部的纤维素酶进行反应， 为解决这一问题，本实验构建了细胞表面展示-释放系统，进而利用不可溶底物 进行纤维素酶的筛选。 本实验采用克隆重组的方法将源于 Clostridium phytofermentans 的内切纤维 素酶 CpCel 5A 构建到细胞表面展示释放体系（pET20b-INP-5A 、pET20b-INP-I-5A 和 pET20b-INP-In-5A ）中，对其进行了初步表达。运用M9 平盘和透明圈法对细 胞表面展示和释放能力进行检测。同时，本实验使用细胞表面展示可控释放体系， 对源于 Clostr