蛋白质分离纯化策略剖析.pdfVIP

ofAnhui 安徽农业科学，Journal Agri．Sei．2009。37(36)：17849—17851，17853责任编辑熊章琴责任校对汪伟 蛋白质分离纯化策略 陈华友1”，张春霞1，马晓珂1，齐向辉1’“(1．江苏大学，江苏镇江2120t3；2．南京工业大学．江苏南京210009) 摘要 系统地介绍了蛋白质分离纯化的依据、原则、过程、特点、问题和对策，为提高我国蛋白质分离纯化水平提供参考。 关键词蛋白质：分离纯化；色谱 中图分类号Q813文献标识码A 文章编号0517-6611(2009)36—17849—03 on and of Strategiesthe PurificationProtein Separation CHEN et for tlua-youm(InstituteBiological 212013) Sciences，JiangsuUniversity，Zhenjiang，Jiangsu AbstractThe andcountermeasureofthe and wereintro- basis，principle，procedure，characteristic，problemproteinseparationpurification dueed referencesfor the and levelsinChina． systematically，whichprovided promotingproteinseparationpurification words and Key Protein；Separationpurification；Chromatography 生物工程以基因工程为核心，主要产品为蛋白质或多 质，例如水蛭素在100℃时不变性，加热后去杂蛋白，又如大 肽。通过多年的努力，我国基因工程“上游”已与国外差距缩 肠杆菌碱性磷酸酯酶有不寻常的抗蛋白酶解的抗性，蛋白酶 小，但“下游”技术，尤其是蛋白质纯化处理与先进国家相比， 处理后，留下较纯的碱性磷酸酯酶；基因工程构建的纯化标 仍有很大差距。笔者主要对蛋白质的分离纯化策略进行了 记，例如在蛋白N端加上6—10个组氨酸，借此与Nl“螯合 综述。 柱结合，经淋洗后，用游离味唑洗脱，或通过将pH值降至 l获得基因工程产品的特点 5．9，使组氨酸充分质子化，不再与N12+结合，而使蛋白 目的产物在初始物料中含量低，而且往往在细胞内。含 纯化‘¨1。 目的产物的初始物料组成复杂，除了目的产物外，还含有大 2．2物料中杂质的种类和性质包括杂质的种类和含量、 量的细胞、代谢物、残留培养基、无机盐等，特别是产物降解 化学性质、分子结构、相对分子量、电荷性及数量、生物学特 酶、产物类似物等对目的产物的分离影响很大。目的产物一 性、稳定性(对于热、pH值、盐、有机溶剂等)、溶解度、吸附性 般是大分子物质，稳定性差，具有生物活性的物质对pH值、 能等。 温度、金属离子、有机溶剂等十分敏感，容易失活、变性；种类 2．3初始物料的特点菌种类型及其代谢特性，包括菌种 繁多，包括有大、中、小分子，结构简单或复杂的有机化合物 表达方式(是否以包含体形式)、副产物种类、产物类似毒素、 以及结构复杂又性质各异的生物活性物质。对这些大分子 蛋白酶种类、原材料和培养基的来源及其质量；生产工艺和 基因工程产品的纯化缺乏必要的数据，似乎每种蛋白都有其 条件，包括灭菌方法和条件、生产方式(连续、批式、半连续)、 独自的纯化方案，放大也往往凭经验，不像抗生素等小分子 生产周期、生产能力、工艺控制条件、因素及方式等；初始物 物质有很多数据可指导放大。应用面广，往往是注射用，对 料的各种性质，包括产物浓度、杂质种类、浓度变化、盐的种 其质量、纯度要求高，无菌、无病