台大医学院第一共研电子报第五期-研发分处.PDF

台大醫學院第一共研電子報 第五期 101 年元月 顯微影像核心 Imaging Core 顯微影像核心公告 樣品製備頇注意事項 擷取影像時應注意事項 基於眼見為憑(Seeing is believing) ，越來越多國際期刊在接受論文刊登時，除 了生理或生化實驗的數據，也要求細胞影像方面的實驗結果。一張好的細胞影像有如 畫龍點睛，勝過千言萬語。拍攝樣品影像資料像其他生理、生化實驗一樣有三要素： 首先需要好的實驗設計，其次是實驗過程着重每一個細節，最後是使用合適的顯微鏡 系統拍下實驗結果。即使圖像需要量化分析，若是拍出品質不好的圖，也會嚴重影響 軟體判讀，使得分析工作倍加困難，甚至無法分析。 確保顯微鏡系統狀況良好，並根據使用者不同的實驗需求，建議使用核心內不同 的顯微鏡設施，為本核心實驗室的首要工作。其次，核心管理員對於影像實驗在樣品 製備、實驗設計、專業技術層面也接受使用者諮詢及相關教育訓練。除了顯微鏡硬體 設備，核心內也提供不同影像分析軟體供使用者進行影像處理、量測分析，對於不熟 悉軟、硬體操作者皆提供諮詢及教學。 本核心提供之儀器、服務及各項操作規則詳見第一期台大醫學院第一共研電子 報。期望顯微影像核心的服務能幫助使用者順利取得影像實驗成果。 黃呈彦 徐華蔓 顯微影像核心公告 一、使用顯微影像核心之顯微鏡頇接受哪些訓練 自 100 年10月份起，凡是新進人員欲使用第一共研顯微影像核心之顯微鏡，必頇 先上本核心所開辦之基礎顯微鏡課程，對顯微鏡之組成與成像原理具有一定概念。其 後針對欲使用之儀器向核心管理員商借儀器操作教學影片，或是預約管理員進行一對 一教學(需收費) ，方可自行預約操作核心內任一開放使用之顯微鏡。 看過儀器操作教學影片，首次上機者，必頇管理員陪同操作 (不收費，但是請事先 知會管理員) ，待管理員確定使用者自行操作無誤後，方可獨立操作機器。 二、影像核心完成區域網路架構 影像核心已完成區域網路配線工程，凡核心內所拍攝的影像檔，除了以該機器的 電腦進行光碟燒錄備份外，也可以將檔案傳輸至核心實驗室內部網域的離線電腦共用 資料夾 data center內，便能到離線電腦區以隨身 硬( 碟存取檔案。) 樣品製備頇注意事項 就像所有的實驗設計一樣，顯微影像拍攝也需要對照組。沒有經過螢光標誌的細 胞是一組，因為不同的細胞株本身就會有不同強度的自體螢光，或是玻片表面有塗佈 幫助細胞黏附的介質也有可能造成比較強的背景值。若是實驗組有超過一組以上的螢 光標誌，在一開始進行抗體梯度測詴實驗時，就要先確定A蛋白的二次抗體不會標誌 B蛋白的一次抗體，而 B蛋白的二次抗體則不會標誌 A蛋白的一次抗體，方可進行共 染。除了共染之實驗組外，每次實驗都要準備單染單一螢光染色( 的對照組，以方便) 拍攝時確認無漏光問題。此外，實驗過程若細胞死亡，不管是因藥物或是乾死，背景 螢光皆會增強，會影響實驗判讀，此時好的對照組 (例如 :未加藥組就可以幫助我們判) 斷訊號真偽。其他不同樣品製備問題則分述於下： 一、關於玻片製作 一般標準細胞樣品玻片製作，實驗首先將細胞種在蓋玻片上進行實驗，再進行固 定、螢光標誌的動作，然後選擇正立顯微鏡觀察，但有些特殊狀況筆者想要提醒大家: 有些使用者會將細胞種在載玻片或是細胞培養玻片(chamber slide) ，或者樣品為數百 毫米的生物組織、胚胎這些樣品因為厚度及不同工作距離需求的問題，有時只能以低 倍率物鏡觀察，因此使用者常因對不到焦距將玻片擠破。除了樣品毀損，且掉落的碎 玻璃常損傷鏡頭、聚光鏡。因此在選擇合適的顯微鏡及物鏡時不可不慎，特殊的樣品 狀況請務必先至核心與顯微鏡技術人員進行諮詢。 封片時，首先要注意種有細胞那一面要確實封入封片膠內，若是放錯面則前功盡 棄。有些實驗室使用不會硬化的水性封片膠，蓋玻片很容易滑動，若是滑動易造成樣 品位置改變、擠壓