微生物脂肪酶的重组表达-生物通.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（５）：１３５～１４０ 微生物脂肪酶的重组表达 阎金勇　闫云君 （华中科技大学生命科学与技术学院教育部分子生物物理重点实验室　武汉　４３００７４） 摘要　微生物脂肪酶在传统和新型工业催化领域中的应用越来越广泛与深入。作为脂肪酶规模 化制备主要途径的高效重组表达，为脂肪酶催化剂的最终形成及工业催化奠定了坚实的技术基 础。概述并讨论了微生物脂肪酶重组表达的最新策略和发展趋势，阐述密码子优化、融合共表 达、杂合启动子、同源高效表达、细胞表面展示和表达文库的高通量筛选等技术特点及其表达应 用现状，指出细胞表面展示表达和表达文库高通量筛选体系为脂肪酶重组表达注入强劲活力；在 此基础上对几种代表性微生物脂肪酶的重组表达进展作一综述，为微生物脂肪酶的重组表达研 究及工业生产提供借鉴。 关键词　微生物脂肪酶　表达体系　展示表达　融合表达　高通量筛选 中图分类号　Ｑ９３９ 　　微生物脂肪酶不仅在油脂深加工、皮革、纺织、造 肪酶都来源于微生物发酵粗酶液。然而，野生菌脂肪 纸、洗涤剂等传统行业中有着广泛应用；而且在生物柴 酶产量较低；大多数真菌存在同工酶，且同工酶含量随 油、化妆业、可降解聚合物、光学纯化合物、脂肪酶传感 着发酵条件的不同而改变；这些同工酶之间的理化性 器、制茶、环境修复等新型领域中的应用也 日益增 质又非常接近，难以分离纯化出单一的纯酶［４］。借助 ［１］ 多 ；尤其是医药和化工产业中高附加值手性中间体 分子生物学技术，从野生菌中克隆出脂肪酶基因，并进 的脂肪酶催化拆分，更加凸显出脂肪酶催化的优越 行异源或同源重组表达，在大幅提高产酶量的同时，使 性［２，３］。因此，工业需求对脂肪酶的规模化生产提出 几种同工酶分离而得到纯酶，从而使脂肪酶更好地得 了更高的要求。从自然界中筛选到的产脂肪酶野生 以应用。随着脂肪酶分子生物学技术的迅猛发展，基 菌，其脂肪酶基因一般受宿主菌的严谨调控，表达的脂 于大肠杆菌 （Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）和毕赤酵母 （Ｐｉｃｈｉａ 肪酶满足自身的代谢即可；而市场导向要求高效表达 Ｐｉａｓｔｏｒｉｓ）等表达体系，涌现出一批高效重组表达策略。 以提高脂肪酶产量。大量微生物脂肪酶基因的克隆与 １．１　密码子优化 重组表达为工业催化保障了酶源，同时经分子改造和 　　不同生物体中密码子的使用频率差别很大，即一种 修饰而获得优异性能的脂肪酶也依赖于表达体系的建 生物体倾向于使用编码氨基酸的特定三联体密码子，这 立。基于重组表达的细胞表面工程和高通量筛选体系 种密码子偏爱性是高产表达的一个主要障碍。生物体的 ［３］ 开辟了脂肪酶催化剂的新领地 。总结并展望了微生 亲缘关系越远，密码子偏爱性产生的频率也就越高。皱 物脂肪酶重组表达的主流策略及趋势，并就典型微生 褶假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｒｕｇｏｓａ）因特殊的密码子偏爱性而 物脂肪酶的重组表达作一综述，旨在为微生物脂肪酶 干扰其脂肪酶基因在异源酵母中的功能表达。为了克服 的工业生产提供借鉴，促进脂肪酶生物催化的应用。 ［５］ 密码子偏爱性问题，Ｂｒｏｃｃａ等 优化核苷酸并合成了全 １　微生物脂肪酶重组表达新策略 长为１６４７个碱基的ｌｉｐ１基因，实现了在毕赤巴斯