山瑞鳖细菌性败血症病原菌的分离鉴定及 其毒力基因检测.PDFVIP

第41 卷 第 9 期 水 产 学 报 Vol. 41, No. 9 2017 年 9 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Sept., 2017 文章编号: 1000-0615(2017)09-1443-12 DOI: 10.11964/jfc.20160910554 山瑞鳖细菌性败血症病原菌的分离鉴定及 其毒力基因检测 1,2 1,3 1,3 4 5 韩书煜 ， 梁静真 ， 覃志彪 ， 黄艳华 ， 韦慕兰 ， 6 6 1,2 1,3* 蒙兰丽 ， 黄 维 ， 胡大胜 ， 黄 钧 (1. 广西水生动物病害诊断实验室，广西 南宁 530005; 2. 广西水产技术推广总站，广西 南宁 530022; 3. 广西大学动物科学技术学院，广西 南宁 530005; 4. 钦州市水产技术推广站，广西 钦州 535000; 5. 都安瑶族自治县水产技术推广站，广西 都安 530700; 6. 田东县水产技术推广站，广西 田东 531500) 摘要：查明广西南宁、贵港和桂平养殖山瑞鳖细菌性败血症的病原菌及其6种毒力基因 的携带情况，为有效防控山瑞鳖细菌性败血症提供参考。本研究以常规方法从患病山瑞 鳖的心脏和肝脏取样、分离细菌，人工感染方法确定分离菌株的致病性，细菌鉴定采用 API 20NE 生化鉴定和16S rRNA分子鉴定相结合的方法进行，PCR扩增法对菌株的溶血素 基因(hemolysin gene, hly) 、气溶素基因(aerolysin gene, Aer ) 、细胞兴奋性肠毒素基因 (cytotonic enterotoxin gene, Alt)、细胞毒性肠毒素基因(cytotoxic enterotoxin gene, Act)、黏附 素基因(major adhesin gene, ahal)和丝氨酸蛋白酶基因(serine protease gene, ahp)6种毒力基因 进行检测。结果显示，从患病山瑞鳖心脏和肝脏中共分离到4株优势菌SRB125、SRB142、 SRB143和SRB345 ，对健康山瑞鳖的平均致死率为97.50%~100.00% ，是引起山瑞鳖细菌 性败血症的病原菌；生化和分子鉴定结果显示，4株分离菌均为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) ，与A. hydrophila L3-5 (KP716701) 菌株的亲缘关系最近，同源相似性均达到 + + + + 99.9% ；6 种毒力基因共包含2 种毒力基因型，在4 株菌株中的分布为hly