第四章-酶的提取及分离纯化.ppt

酶纯化的基本原则： ①建立一个方便灵敏的分析方法； ②选择有效的纯化方法，尽可能减少纯化步骤； ③常在低温（4℃）条件下进行纯化，以避免酶的变性。 提取原则 a. 相似相溶。 b. 远离等电点的pH值，溶解度增加。 （二） 有机溶剂沉淀（降低介电常数） 利用酶等蛋白质在有机溶剂中的溶解度不同而使之分离的方法。 1. 沉淀机理 降低溶液的介电常数 部分地引起蛋白质脱水 2. 常用有机溶剂 乙醇、丙酮、甲醇，用量一般为酶液体积的2倍左右，终浓度为70%。 3.优缺点： 优点：1）分辨率比盐析法高 2） 沉淀不需脱盐 3）溶剂易蒸发，沉淀易离心 缺点：1）容易引起蛋白质变性失活 2)有机溶剂易燃、易爆，对安全要求较高。 （三） 等电点沉淀(isoelectric precipitation) 1.原理 蛋白质在等电点时溶解度最低 不同的蛋白质具有不同的等电点 2. 使用方法 单独使用较少（用于从粗酶液中除去某些等电点相距较大的杂蛋白），多与其它方法联合使用（如盐析法、有机溶剂法），因蛋白质在等电点时仍有一定的溶解度。 根据推动力的产生条件不同，过滤分为三种： 常压过滤 加压过滤