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人HSPC117基因对细胞迁移行为影响及基因表观调控的初步研究（Preliminary study on the influence of human HSPC117 gene on cell migration behavior and gene regulation）
目 录
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摘 要I
英文摘要 II
1 前 言 1
1.1 HSPC117 蛋白概述 1
1.1.1 HSPC117 基因结构特征 1
1.1.2 HSPC117 蛋白生物学功能 2
1.1.3 HSPC117 蛋白研究现状 3
1.2 哺乳动物细胞的体外培养与细胞生长 3
1.2.1 体外细胞培养方式与细胞类型 3
1.2.2 细胞增殖 4
1.2.3 细胞生长 4
1.3 哺乳动物 DNA 甲基化研究概况 5
1.3.1 DNA 甲基化 5
1.3.2 哺乳动物 DNA 甲基化研究进展 5
1.3.3 DNA 甲基化与生物机体关联 6
1.3.4 DNA 甲基化转移酶抑制剂——5-氮杂-2’-脱氧胞苷 7
1.4 哺乳动物组蛋白乙酰化研究概况 7
1.4.1 组蛋白修饰 7
1.4.2 哺乳动物组蛋白乙酰化研究进展 7
1.4.3 组蛋白乙酰化与生物机体的关联 8
1.4.4 组蛋白去乙酰化抑制剂——曲古抑菌素 A 9
1.5 基质金属蛋白酶（MMPs ）及其组织金属蛋白酶抑制剂（TIMPs ）与细胞迁移运动 9
1.5.1 细胞迁移运动及其机制 9
1.5.2 基质金属蛋白酶家族（MMPs ）结构特征 10
1.5.3 基质金属蛋白酶-2，-14 （MMP-2 ，-14 ） 11
1.5.4 组织金属蛋白酶抑制因子-2 （TIMP-2 ） 11
1.6 实验目的与意义 12
2 实验材料与方法 13
2.1 实验材料 13
2.1.1 实验细胞株 13
2.1.2 实验试剂 13
2.1.3 主要仪器设备 13
2.1.4 主要药品的配制 14
2.1.5 主要生物学软件 14
2.1.6 实验相关生物信息学网站 15
2.2 实验方法 15
2.2.1 人 HSPC117 基因克隆与测序 15
2.2.2 pEGFP-C1-HSPC117 重组质粒构建 18
2.2.3 HSPC117 基因亚细胞定位 20
2.2.4 HSPC117 基因过表达对 JEG-3 细胞中 MMP-2 、MMP-14 、TIMP-2 基因表达的影响 . 21
2.2.5 细胞划痕法测定 HSPC117 基因过表达对细胞迁移的影响 23
2.2.6 不同浓度 TSA 和 5-aza-CdR 单独用药对 JEG-3 细胞生长的影响 23
2.2.7 Real-time PCR 检测 TSA 与 5-aza-CdR 单独及联合用药对 JEG-3 细胞中 HSPC117 基因
表达的影响 24
3 结果与分析 26
3.1 HSPC117 基因的 TA 克隆与亚细胞定位结果 26
3.1.1 人 HSPC117 基因目的片段的 PCR 扩增结果 26
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