酶法合成EPA、DHA甘油三酯的研究（Study on enzymatic synthesis of EPA and DHA triglyceride）.pdfVIP

摘 要 本研究对富含二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA) 的甘油酯型产品 的酶法合成进行了系统研究，主要目的是利用全酶法合成高 EPA 、DHA 含量的 甘油三酯产品。以精炼天然鱼油为起始原料，本研究利用固定化脂肪酶 Lipozyme RM IM 为催化剂，通过填充床酶反应器的催化方式将天然鱼油部分醇解，进行 EPA 和 DHA 的富集；将收集到的鱼油醇解产物通过串联的三级分子蒸馏处理， 得到了 EPA 和 DHA 含量较高的甘油酯型产品，EPA 和 DHA 的含量由初始的 18.1%、12.3%，上升到了 31.3%、22.4% 。分子蒸馏同时实现了副产物乙酯中 EPA 和 DHA 的回收和初步浓缩（EPA 26.7%, DHA 18.1% ），将乙酯经尿素包合纯化 后 EPA 可以达到 41.8% ，DHA 可以达到 31.1% 。由于脂肪酸乙酯与混合甘油酯 （含有大量甘油二酯和单甘油酯）具有良好的互溶性，本研究可以在无溶剂体中 利用固定化脂肪酶催化浓缩鱼油乙酯和混合甘油酯进行酯交换反应合成富含 EPA 和 DHA 的甘油三酯。通过单因素实验确定了较适宜的工艺参数：在底物摩 尔比（浓缩鱼油乙酯/甘油酯游离羟基）为 1:1 时，选择固定化脂肪酶 Novozym 435 为催化剂，反应温度为 60℃，Novozym 435 的添加量为底物混合物的2% 。依此 条件组合进行酯交换试验，产物经分子蒸馏分离后得到的甘油酯中甘油三酯的含 量可以达到 82.3%，基本不含有单甘油酯（0.2% ）；甘油酯中的 EPA 和 DHA 含 量分别可以达到 40.4%和 28.6% 。将甘油酯混合物与乙酯分离，收集混合甘油酯， 利用偏甘油酯脂肪酶 Lipase G50 选择性地水解混合甘油酯中的甘油二酯，以达 到纯化甘油酯中甘油三酯的目的。从单因素分析看，在水分含量为 20%~100% ， pH 为 4~6.5 ，温度为20 ℃~45 ℃间的范围条件下水解反应都能发生，其最合适的 水解条件为 pH6.0 ，温度40 ℃，水分含量 60% 。在单因素分析的基础上，综合考 虑水分含量、温度和 pH 值 3 个因素对水解反应的影响，采用响应面分析方法， 得到了水解反应模型，。实验结果表明，水解反应的最优条件为：水分含量 57.64%，pH 5.81 、温度 30.27 ℃；水解反应过程中水分含量和pH 以及水分含量 和温度对水解产物中甘油三酯纯度的交互作用显著。水解模型达到显著水平，模 型可以对不同条件下的水解反应情况进行分析和预测。水解产物经分子蒸馏分离 后，可以得到以甘油三酯为主要成分的 EPA 、DHA 产品，其含量分别可以达到 42.14%和 29.6% 。该方法过程简单，甘油酯产物中以甘油三酯的形式为主，反应 产物易于分离，有应用于工业化生产的前途。 关键词：海洋鱼油；EPA ；DHA ；脂肪酶；酶反应器；甘油酯；分子蒸馏 I ABSTRACT This paper summarizes a systematical study and a model of Enzyme Syntheticism for concentrated EPA (Eicosapentaenoic acid ) and DHA (Docosahexaenoic acid) Triglycerides. For this study a packed bed reactor was used and filled with immobilized lipase Lipozyme RMIM as the catalytic agent to alcoholize the refined marine fish oil ( as raw material, with EPA 18.1% and DHA 12.3%) and concentrate the EPA and DHA. After reaction EPADHA concentrated Glycerides (EPA 31.3%, DHA 22.4%) was separated from the reaction p