基因工建技术生产重组蛋白.pptVIP

不同表达系统的比较 重组基因工程菌的高密度培养 培养基组成的优化 流加 固定化 罐流床 微过滤 下 游 培养基组成的优化 碳源种类的选择 下游：培养基组成的优化 基因工程菌培养技术 流加培养 2L发酵罐中流加培养盘基网柄菌生产hFasL 基因工程菌的固定化培养 将基因工程菌固定在多孔载体上，可提高菌体密度，实现连续发酵，为利用其生产异源蛋白提供了有效途径。 多孔载体：多孔陶瓷、浮石、片状硅胶泡沫和柱状硅胶泡沫等。 CeramTec (1.5-2.5 mm） Pumice（(1.5-2.5 mm） Immobasil FS (0.8D ,0.2 H ) Immobasil R (4O.D/2I.D ,4L) 固定化培养基因工程菌细胞 载体表面和内部的细胞固定化电镜扫描照片 多孔陶瓷 浮石 生物微胶囊固定化 罐流床反应器连续培养固定化细胞 利用微过滤实现工程菌高密度培养 重组蛋白的分离纯化（下游技术） 生化分离工作的一般过程 动、植物组织、体液等 胞外产物 提取 发酵液 → 预处理 → c分离 → c破碎 → 碎片分离 → 初步纯化 → 精制 → 制成品 培养液 加 热 沉 淀 匀 化 离 心 沉 淀 分子筛 无菌过滤 酶反应 调 pH 离 心 超 声 萃 取 吸 附 离 子 超 滤 絮 凝 过 滤 胞 溶 过 滤 萃 取 亲 和 冻 干 错流过滤 研 磨 错流过滤 超 滤 吸 附 喷 干 憎 水 结 晶 电 泳 重组蛋白的分离纯化（下游技术） 预处理及固液分离技术 细胞破碎 重组蛋白的包涵体处理技术 离心 膜分离技术 双水相萃取 反胶束提取纯化技术 超临界萃取技术 吸附（色谱）分离技术 活性炭 氧化铝 硅胶 滑石粉 硅藻土 大网格聚合物吸附 固相析出分离法 盐析法 有机溶剂沉淀法 等电点沉淀 其它沉淀法 ? 水溶性非离子型聚合物沉淀剂 ? 金属离子和络合物沉淀 ?离子型多聚物沉淀剂 ?亲和沉淀 结晶法 重组蛋白的色谱分离法 凝胶色谱/分子筛色谱 离子交换 亲和层析 电色谱 电泳分离技术 平板电泳 连续凝胶电泳 等电聚焦点用 毛细管电泳 连续流动电用 无载体连续流动电泳 * * ** 利用基因工程技术生产重组蛋白 从基因到蛋白的复制、转录和翻译过程 功能蛋白 组装 什么是基因工程 基因工程(Genetic Engineering)原称遗传工程。是指在分子水平上将一种或多种生物体(供体)的DNA片断（目的基因）与载体DNA分子（如质粒、病毒等）在体外进行拼接重组,产生新的自然界从未有过的重组DNA分子，然后转入另一种生物体(受体)内，使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状的技术。基因工程有时也称为重组DNA技术(DNA Recombination)或分子克隆技术(Molecular Cloning)。 什么是重组蛋白