重组蛋白A 亲和填料的制备及其性能评价.pdf

! #! 年 # 月 !#$ $ %$ # ’()’*+ ! #! !#$%% ’()*$+, (- !*(.+/(0*+1 2 % ’ ( 技术与应用 ,-. ：# $ $)!*/ 01 $ $ ##!$ $ ! ##$ % #% 重组蛋白! 亲和填料的制备及其性能评价 # ，! ! ! ! ! # 郭明明 ，- 王俊玲 ，- 吴彦卓 ，- 徐明波 ，- 高向东 （#$ 中国药科大学生命科学与技术学院，江苏 南京 ! #( ；! $ 北京双鹭药业股份有限公司，北京 #* # ） 摘要：为了获得一种优良的抗体纯化介质，制备了重组金黄色葡萄球菌蛋白= （*1*37( = ）亲和填料，并考察了所 制备的亲和填料的纯化性能。利用自行构建的*1*37( = 工程菌，经诱导表达、纯化获得 *1*37( = 纯品，将其偶 联到经环氧氯丙烷活化的03?@’*A3 * B’A B#C 凝胶上，得到*1*37( = 亲和填料，并使用兔抗尿酸氧化酶抗体 对该填料的性能进行验证。结果显示，在自制的*1*37( = 亲和填料上*1*37( = 浓度为#. + / # 0 * 6#/ D 。采用 0:’:@’*E 模型分析，得到其解离常数和最大表观吸附量分别为 !. !% / # 0 ) 6#/ D 和 !. () 8/ D ，说明制得的 *1*37( = 亲和填料对抗体有很好的结合能力。将该填料于. # 6#/ D %’-F 溶液中浸泡 # @ ，其色谱性能未见变 化。将该填料用于纯化兔抗体，湿胶结合抗体量可达 #( 68/ 6D ；一步柱色谱即可得到电泳纯度的抗体样品，回收 率高于(G 。本研究为*1*37( = 亲和填料的国产化奠定了基础。 关键词：重组金黄色葡萄球菌蛋白= ；亲和填料；制备；纯化；抗体 中图分类号： -+%- - - 文献标识码：=- - - 文章编号：#5%) #$ （! #! ） #5%5+ #$%#’()* *+ ,-#,’$#(.’()* )/ #$,)01(**’ %#)’$(* ! //(*(’2 %,3(*4 HI- J7(867(8 # ，! ，K=%H )(#7(8! ，KI L’(M@)! ，I J7(8N! ! ，H=- 7’(8E(8 # （!! #$$% % #’ ( )’ % *+)%,+% -,. /%+0,#$#1 ，0),- 2 0-34 -+%5 6)+-$ 7,)8%39)61 ，: -,; ), !###$ ，0),- ； ! %); ), *( 2 0-34 -+%5 6)+-$ #! ，( 6.! ， %); ), !###%! ，0),- ） !15’#,’ ：2 N’7( ’( 3O:3##3( ’(7NE+ ?)*797:’7( 63E7)6 ，’997(7+ :@*6’8*’?@7: ?’:P5 7(8 C7@ *3:6N7(’( A’?@+#:::’# ?*37( = （*1*37( = ）C