PCR和相关技术.pptVIP

一、聚合酶链式反应（PCR） 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）：是一种体外酶促扩增特定DNA片段的技术，即将微量的DNA进行成倍扩增。 （一）原理： 建立在DNA复制原理基础上的一种技术。 （二）典型的PCR包括许多循环，每个循环包括三个步骤： （1）高温变性模板使之成为单链，95度约1min； （2）低温使引物与单链模板退火（复性）55度左右； （3）中温使引物沿模板延伸，75度左右。 经n次（25-30次）循环后，反应混合物中所含目的DNA片段（双链）的拷贝数理论上最高值为2n。但是，在第三轮循环后，才会出现目的DNA片段。 思 考 题 扩增片断的长度的是如何决定的？ 若以N 表示扩增循环数，当一条双链模板循环扩增30次时，反应体系中总分子数多少？非目的产物多少？目的产物多少？ 若用一条引物能否实现大量扩增？ （三）PCR反应体系： 反应缓冲液（10×PCR Buffer） 脱氧核苷三磷酸底物（dNTPmix） 耐热DNA聚合酶（Taq酶，可耐受95度左右高温） 寡聚核苷酸引物（Primer1，Primer2，约20个核苷酸，与目的DNA两侧的区域互补） 靶序列（DNA模板）五部分组成。 1. 耐热DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶的特点 Taq DNA聚合酶是从一种极度嗜热水生栖热菌YT-1中分离纯化