质粒DNA提取-郑小煜.docxVIP

质粒DNA的提取、纯化和检测姓名：郑小煜学号：201100140069班级：2011级生技班组别：第二组同组者：赵莉、高瑞实验目的掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的作用。掌握碱变性提取法提取质粒DNA的方法。学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。掌握凝胶的观察方法，并学会分析。实验原理质粒(plasmid)质粒是一种染色体外的稳定遗传因子,为双链、闭合环状的DNA分子，并以超螺旋状态存在于宿主的细胞质中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒的存在使宿主细胞具有一些额外的特性，如对抗生素的抗性等。质粒在细胞内的复制一般有两种类型：严紧控制型（Strengent control）：复制受宿主细胞的严格调控，拷贝数低；松弛控制型（Relaxed control）：复制不受宿主细胞的调控，拷贝数高，适用于基因工程中做载体。提取和纯化质粒DNA的方法很多，目前常用的有：碱变性提取法、煮沸法、羟基磷灰石柱层析法、EB-氯化铯密度梯度离心法和Wizard法等。其中，碱变性提取法最为经典和常用，适于不同量质粒DNA的提取。该方法操作简单，易于操作，一般实验室均可进行。提取的质粒DNA纯度高，可直接用于酶切、序列测定及分析。EB-氯化铯密度梯度离心法，主要适用于相对分子质量与染色体DNA相近的质粒，具有纯度高、步骤少